Havo-suyuqlik interfeysi hujayralari madaniyati - Air-liquid interface cell culture

Traxeya ALI hujayra madaniyati psevdostratifikatsiyalangan epiteliyasi qayta tiklashga qaratilgan in vitro

Havo suyuqlik interfeysi hujayralari madaniyati (ALI) usuli hisoblanadi hujayra madaniyati ularning yordamida bazal ildiz hujayralari bazal sirtlari bilan muhit bilan aloqa qilib o'stiriladi va hujayra qatlamining yuqori qismi havoga ta'sir qiladi. Keyin hujayralar ko'tariladi va muhit a-ning mukotsilyar fenotipi paydo bo'lguncha o'zgartiriladi psevdostratlangan epiteliy, traxeyaga o'xshash epiteliy.[1][2]

Hujayra etishtirishning ushbu usuli nafas olish epiteliyasining asosiy jihatlarini o'rganish uchun foydalanishga qaratilgan, masalan hujayradan hujayraga signalizatsiya, kasalliklarni modellashtirish va nafasni tiklash.[1][2]

Havo-suyuqlik interfeysi hujayralari madaniyati, odatda, nafas olish yo'llarining psevdostratifikatsiyalangan striksiyasini tiklashga qaratilgan holda, standart hujayra madaniyati amaliyoti bilan solishtiriladi. in vitrova (yuqoridan pastgacha) 1) havo, 2) psevdostratifikatsiyalangan epiteliy va 3) suyuq muhitning nafas yo'llarini (yuqoridan pastga) ushlab turishni maqsad qilgan. Standart hujayra madaniyati jarayonlari havo yo'liga xos emas yoki boshqa hujayralarni parvarish qilishni talab qiladigan organlar tizimi atrofida aylanadi in vitro.

Protokol

Havo-suyuqlik interfeysi madaniyati protokoli ikkita asosiy bosqichga asoslanadi: epiteliya hujayralarini organizmdan ajratish va shu hujayralarni madaniyati.

Izolyatsiya

Epiteliy hujayralari bo'lgan organlar ajratiladi[1] (ajratilgan) va har qanday aralashmalarni tozalash uchun PBS-ga joylashtirilgan va bu ajratilgan organlar yordamida hazm qilinadi tripsin. Ovqat hazm qilishdan so'ng, ROCK inhibitori (Rho bilan bog'liq kinaz inhibitör) ajratilgan hujayralarning uyali apoptozini oldini olish uchun qo'shiladi. To'qimalar bilan aralashtirilgan hazm qilingan uyali tarkib qoladi; pronase /DNK o'lik uyali materialni va qolgan barcha oqsil moddalarini tozalash uchun qo'shiladi. Olingan material ommaviy axborot vositalarida mayda to'g'raladi va alohida izolyatsiya qilingan hujayra namunalari belgilangan tartibda joylashtiriladi mikrosentrifuga naychalar va 37 ° C da 30-40 daqiqa davomida chayqatiladi. Hujayralar inkübe qilinganidan so'ng, ular o'sish uchun transwell membranalariga yopishtiriladi.

Madaniyat

O'sish va natijada hujayralarni ozuqa moddalari bilan boyitish uchun SABM (Kichik havo yo'li bazal vositasi) bilan plastinka hujayralari farqlash.[1] Hujayralar qoplangandan so'ng, ular 3-7 kun davomida ehtiyotkorlik bilan kuzatilib (har kuni muhit o'zgarganda) kerakli birlashma hosil bo'lguncha o'stiriladi.

Yaqinda, o'rganish In vitro inson CD34 (+) ildiz hujayralaridan boshlangan II tipdagi pnevmotsitlarning avlodi, havo suyuqligi interfeysi hujayralarini etishtirish usuli aniq ko'rsatildi.[3]

Ilmiy o'rganishda foydalanish

Havo-suyuqlik interfeysi madaniyati ko'pchilikda qo'llaniladi ildiz hujayrasi psevdostratlangan epiteliyani tiklashga qaratilgan tadqiqotlar in vitro. Ushbu tadqiqotlar turli mavzulardagi yangi kashfiyotlarga yordam berishi mumkin:

Saraton

Modellashtirishda saraton va boshqa turli xil kasalliklar, traxeya epiteliysining bazal qatlamidagi ildiz hujayralari (bazal ildiz hujayralari) ajratilgan va 3D rivojlanishida ishlatilgan organoidlar turli xil tadqiqotlar uchun, shu jumladan ishlatilishi mumkin o'sma tadqiqotlar. Amaldagi hujayra madaniyati usuli o'sish omillari bilan hujayralarni kultivatsiyaga ajratishni vaqt o'tishi bilan o'z ichiga oladi. Hujayralar o'stirilgandan so'ng, ular aralashtirildi Matrigel va 3D organoidlarni hosil qilish uchun o'stirildi.[4][5]

Hujayraning o'sishi / differentsiatsiyasi

Psevdostratlangan epiteliyni modellashtirishda in vitrohujayralarning tabiati - ularning differentsiatsiya yo'llari, o'sish mexanizmi, shikastlanish holatida tiklash / javob berish mexanizmini aniqlash uchun ko'proq uyali tadqiqotlar o'tkazildi. So'nggi bir tadqiqot shuni ko'rsatdiki, nafas olish epiteliyasidagi differentsial hujayralar (sekretor hujayralar va kirpikli hujayralar birinchi navbatda) o'zlarining soddaligi holatlariga ajralib, yana poyaga o'xshash bo'lishi mumkin.[1][5]

Moslashtirilgan protokol: bazal ildiz hujayralarida ildizga o'xshash xususiyatlarni saqlash

Havo-suyuqlik interfeysi madaniyati protokoliga moslashish sifatida sodda ildiz hujayralari xususiyatlarini uzoq vaqt davomida saqlab turish uchun ALI ramkasi yordamida yordamchi protokollar ishlab chiqildi.[6]

Adabiyotlar

  1. ^ a b v d e Tata, Purushotama Rao; Mou, Xongmey; Pardo-Saganta, Ana; Chjao, Rui; Prabxu, Mifili; Qonun, Brendon M.; Vinarskiy, Vladimir; Cho, Jozalin L.; Breton, Sylvie (2013 yil noyabr). "Vivo jonli epiteliya hujayralarini ildiz hujayralariga ajratish". Tabiat. 503 (7475): 218–223. doi:10.1038 / nature12777. ISSN  1476-4687. PMC  4035230. PMID  24196716.
  2. ^ a b "Nafas olish tadqiqotlari uchun havo-suyuqlik interfeysi madaniyati". www.stemcell.com. Olingan 2018-03-30.
  3. ^ Srikant, Lokanatan; Venkatesh, Katari; Sunitha, Manne Mudhu; Kumar, Pasupuleti Santhosh; Chandrasekhar, Chodimella; Vengamma, Bxuma; Sarma, Potukuchi Venkata Gurunadha Krishna (2016 yil fevral). "In vitro pnevmotsitlarning II turini yaratish inson CD34 (+) ildiz hujayralarida boshlanishi mumkin". Biotexnologiya xatlari. 38 (2): 237–242. doi:10.1007 / s10529-015-1974-2. ISSN  1573-6776. PMID  26475269.
  4. ^ Rok, Jeyson R.; Onaitis, Mark V.; Ravlinz, Emma L.; Lu, Yun; Klark, Cheril P.; Xue, Yan; Randell, Skott X.; Hogan, Brigid L. M. (2009-08-04). "Bazal hujayralar sichqoncha traxeyasi va odamning havo yo'li epiteliysining ildiz hujayralari sifatida". Milliy fanlar akademiyasi materiallari. 106 (31): 12771–12775. doi:10.1073 / pnas.0906850106. ISSN  0027-8424. PMC  2714281. PMID  19625615.
  5. ^ a b Tata, Purushotama Rao; Rajagopal, Jayaraj (2017-03-01). "O'pkada plastika: hujayra identifikatsiyasini yaratish va buzish". Rivojlanish. 144 (5): 755–766. doi:10.1242 / dev.143784. ISSN  0950-1991. PMC  5374348. PMID  28246210.
  6. ^ Mou, Xongmey; Vinarskiy, Vladimir; Tata, Purushotama Rao; Brazauskas, Karissa; Choi, tez orada H.; Kruuk, Adrianne K.; Chjan, Bing; Sulaymon, Jorj M.; Tyorner, Bret (2016). "Ikkala SMAD signalizatsiyasi inhibisyoni turli xil epiteliya bazal hujayralarining uzoq muddatli kengayishiga imkon beradi". Hujayra ildiz hujayrasi. 19 (2): 217–231. doi:10.1016 / j.stem.2016.05.012. PMC  4975684. PMID  27320041.