Karboksifloresin süksinimidil efiri - Carboxyfluorescein succinimidyl ester

Ushbu maqola Carboxyfluorescein süksinimidil esteri haqida. Kristal maydonini barqarorlashtirish energiyasi uchun qarang Kristal maydonini barqarorlashtirish energiyasi.
6-karboksifloresin süksinimidil efiri
Carboxyfluorescein succinimidyl ester.png
Ismlar
Boshqa ismlar
CFSE; Karboksifloresin N-suktsinimidil efiri
Identifikatorlar
3D model (JSmol )
ChemSpider
Xususiyatlari
C25H15NO9
Molyar massa473.393 g · mol−1
Boshqacha ko'rsatilmagan hollar bundan mustasno, ulardagi materiallar uchun ma'lumotlar berilgan standart holat (25 ° C [77 ° F], 100 kPa da).
☒N tasdiqlang (nima bu tekshirishY☒N ?)
Infobox ma'lumotnomalari

Karboksifloresin süksinimidil efiri (CFSE) a lyuminestsent hujayra binoni bo'yoq. CFSE hujayra o'tkazuvchan va kovalent juftliklardir süksinimidil guruhi, hujayra ichidagi molekulalarga,[1] ayniqsa, hujayra ichi lizin qoldiqlar va boshqa omin manbalari. Ushbu kovalent birikish reaktsiyasi tufayli lyuminestsent CFSE hujayralar ichida juda uzoq vaqt saqlanib turishi mumkin. Bundan tashqari, ushbu barqaror bog'lanish tufayli, hujayralar tarkibiga kirgandan so'ng, bo'yoq qo'shni hujayralarga o'tkazilmaydi.

CFSE odatda aralashtiriladi karboksifloresin diatsetat süksinimidil efiri (CFDA-SE), garchi ular bir xil molekula bo'lmasa ham; CFDA-SE, atsetat guruhlari tufayli, hujayra o'tkazuvchanligi yuqori, CFSE esa juda kam. Flüoresan bo'lmagan CFDA-SE ga kiradi sitoplazma ning hujayralar, hujayra ichidagi esterazlar atsetat guruhlarini olib tashlaydi va molekulani lyuminestsent efirga aylantiradi.

CFSE dastlab lyuminestsent bo'yoq sifatida ishlab chiqilgan bo'lib, uni barqaror etiketlash uchun ishlatilishi mumkin edi limfotsitlar va ularning ko'p oy davomida hayvonlar ichida ko'chishini kuzatib boring.[2] Keyingi tadqiqotlar shuni ko'rsatdiki, bo'yoq yordamida limfotsitlarni kuzatish mumkin ko'payish, ikkalasi ham in vitro va jonli ravishda, hujayraning har bir bo'linishidan keyin qiz hujayralarida CFSE lyuminestsentsiyasining izchil kamayib borishi tufayli.[3] Faqatgina cheklov shundaki, yuqori konsentratsiyadagi CFSE hujayralar uchun zaharli bo'lishi mumkin. Shu bilan birga, CFSE yorlig'i optimal ravishda amalga oshirilganda, CFSE lyuminestsentsiyasi avtofluoresans fonidan ajralib turadigan darajada past bo'lishidan oldin taxminan 7-8 hujayra bo'linishini aniqlash mumkin. Shunday qilib, CFSE limfotsitlarning ko'payishi, migratsiyasi va joylashishini bir vaqtning o'zida kuzatishga imkon beruvchi immunologik tadqiqotlar uchun juda qimmatli lyuminestsent bo'yoqni anglatadi. Turli xil limfotsitlar hujayralari yuzasi markerlariga qarshi lyuminestsent antikorlardan foydalanish bilan, shuningdek, turli xil limfotsitlar quyi qatlamlarining ko'payish xatti-harakatlarini kuzatish mumkin.[4] Bundan tashqari, boshqa usullardan farqli o'laroq, keyingi tahlil qilish uchun CFSE etiketli hayotiy hujayralarni tiklash mumkin.

CFSE-ning dastlabki tavsifidan buyon u minglab immunologik tadqiqotlarda ishlatilgan, Kurts va boshq.[5] Ammo, ehtimol, CFSEning eng muhim tekshiruvlari limfotsitlarning ko'plab effektor funktsiyalari, masalan, sitokin tomonidan ishlab chiqarish T limfotsitlar,[6][7] va antikor sinfni almashtirish tomonidan B hujayralari,[8] bo'linishga bog'liq. CFSE ma'lumotlarini tahlil qilish va immunitet ta'sirining turli jihatlarini tekshirish uchun murakkab matematik modellar ham ishlab chiqilgan.[9][10][11][12][13] Bundan tashqari, CFSE dan foydalanish immunitet tizimidan tashqariga chiqdi, bo'yoq boshqa ko'plab hujayra turlarining ko'payishini kuzatish uchun ishlatiladi. silliq mushak hujayralari,[14] fibroblastlar,[15] gematopoetik ildiz hujayralari[16] va hatto bakteriyalar.[17] CFSE-ning yana bir yangi qo'llanilishi - bu uchun foydalanish in vitro va jonli ravishda belgilash sitotoksik limfotsitlar.[18][19][20][21]

Endi limfotsitlarni (va boshqa hujayralar turlarini) yuqori darajadagi ishonchlilik va aniqlik bilan belgilash uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan batafsil protokollar mavjud.[22][23][24] Shu bilan birga, eng muhim parametrlardan biri bu o'rganilayotgan hujayra populyatsiyasining CFSE bilan juda qattiq belgilanmaganligini ta'minlashdir, chunki bunday hujayralar hayotga yaroqli bo'lishiga qaramay sub-optimal ravishda ko'payadi.

Adabiyotlar

  1. ^ Parish CR (dekabr 1999). "Limfotsitlar migratsiyasi va tarqalishini o'rganish uchun lyuminestsent bo'yoqlar". Immunologiya va hujayra biologiyasi. 77 (6): 499–508. doi:10.1046 / j.1440-1711.1999.00877.x. PMID  10571670.
  2. ^ Weston SA, Parish CR (oktyabr 1990). "Limfotsitlar migratsiyasini o'rganish uchun yangi lyuminestsent bo'yoqlar. Oqim sitometriyasi va lyuminestsentsiya mikroskopi bilan tahlil qilish". Immunologik usullar jurnali. 133 (1): 87–97. doi:10.1016 / 0022-1759 (90) 90322-M. PMID  2212694.
  3. ^ Lyons AB, Parish CR (may 1994). "Oqim sitometriyasi orqali limfotsitlar bo'linishini aniqlash". Immunologik usullar jurnali. 171 (1): 131–7. doi:10.1016/0022-1759(94)90236-4. PMID  8176234.
  4. ^ Fazekas de St Groth B, Smit AL, Koh WP, Girgis L, Cook MC, Bertolino P (dekabr 1999). "Karboksifloresin diatsetat süksinimidil efiri va bokira limfotsit: osmonda qilingan nikoh". Immunologiya va hujayra biologiyasi. 77 (6): 530–8. doi:10.1046 / j.1440-1711.1999.00871.x. PMID  10571674.
  5. ^ Kurts C, Kosaka H, ​​Carbone FR, Miller JF, Heath WR (iyul 1997). "Ekzogen o'z-o'zidan antijenlarning I sinf bilan cheklangan o'zaro ko'rsatilishi autoreaktiv CD8 (+) T hujayralarining yo'q qilinishiga olib keladi". Eksperimental tibbiyot jurnali. 186 (2): 239–45. doi:10.1084 / jem.186.2.239. PMC  2198972. PMID  9221753.
  6. ^ Gett AV, Xojkin PD (1998 yil avgust). "Hujayraning bo'linishi T xujayrasi sitokin repertuarini tartibga soladi va immunitetni tartibga solish mexanizmini ochib beradi". Amerika Qo'shma Shtatlari Milliy Fanlar Akademiyasi materiallari. 95 (16): 9488–93. doi:10.1073 / pnas.95.16.9488. PMC  21365. PMID  9689107.
  7. ^ Bird JJ, Brown DR, Mullen AC va boshq. (1998 yil avgust). "Helper T hujayralari differentsiatsiyasi hujayra tsikli tomonidan boshqariladi". Immunitet. 9 (2): 229–37. doi:10.1016 / S1074-7613 (00) 80605-6. PMID  9729043.
  8. ^ Xodkin PD, Li JH, Lyons AB (iyul 1996). "B hujayraning differentsiatsiyasi va izotipning almashinishi bo'linish tsikli raqamiga bog'liq. Eksperimental tibbiyot jurnali. 184 (1): 277–81. doi:10.1084 / jem.184.1.277. PMC  2192686. PMID  8691143.
  9. ^ Nordon RE, Nakamura M, Ramirez C, Odell R (dekabr 1999). "Bo'linishni kuzatish orqali o'sish kinetikasini tahlil qilish". Immunologiya va hujayra biologiyasi. 77 (6): 523–9. doi:10.1046 / j.1440-1711.1999.00869.x. PMID  10571673. S2CID  5696309.
  10. ^ Gett AV, Xodkin PD (sentyabr 2000). "T hujayralari tomonidan signallarni birlashtirish uchun uyali hisoblash". Tabiat immunologiyasi. 1 (3): 239–44. doi:10.1038/79782. PMID  10973282.
  11. ^ De Bur RJ, Ganusov VV, Milutinovich D, Xodkin PD, Perelson AS (2006 yil iyul). "CFSE ma'lumotlaridan limfotsitlarning bo'linishi va o'lim ko'rsatkichlarini baholash". Matematik biologiya byulleteni. 68 (5): 1011–31. doi:10.1007 / s11538-006-9094-8. hdl:1874/22578. PMID  16832737.
  12. ^ Callard R, Hodgkin P (2007 yil aprel). "T- va B-hujayralar o'sishi va differentsiatsiyasini modellashtirish". Immunologik sharhlar. 216: 119–29. doi:10.1111 / j.1600-065X.2006.00498.x. PMID  17367338.
  13. ^ Hawkins ED, Hommel M, Turner ML, Battye FL, Markham JF, Hodgkin PD (2007). "CFSE seriyali ma'lumotlari yordamida limfotsitlarning ko'payishini, omon qolish va farqlanishini o'lchash". Tabiat protokollari. 2 (9): 2057–67. doi:10.1038 / nprot.2007.297. PMID  17853861.
  14. ^ Sukkar MB, Stenli AJ, Bleyk AE va boshq. (2004 yil oktyabr). "'Proliferativ 'va' sintetik 'nafas yo'llarining silliq mushak hujayralari populyatsiyalarni bir-biriga bog'lab turadi ». Immunologiya va hujayra biologiyasi. 82 (5): 471–8. doi:10.1111 / j.0818-9641.2004.01275.x. PMID  15479432.
  15. ^ Xil LY, Kim JY, Yoon JB va boshq. (1997 yil dekabr). "Insulin 3T3 L1 fibroblastlaridagi hujayra tsiklining rivojlanishiga cheklangan ta'sir ko'rsatadi". Molekulalar va hujayralar. 7 (6): 742–8. PMID  9509415.
  16. ^ Oostendorp RA, Audet J, Eaves CJ (2000 yil fevral). "Hujayra bo'linishini yuqori aniqlikda kuzatib borish, in vitro va in vivo jonli stimulyatsiya qilingan gemotopoetik ildiz hujayralarining o'xshash hujayra tsikli kinetikasini taklif qiladi". Qon. 95 (3): 855–62. doi:10.1182 / qon.V95.3.855.003k41_855_862. PMID  10648396.
  17. ^ Ueckert JE, Nebe von-Caron G, Bos AP, ter Steeg PF (oktyabr 1997). "Lactobacillus plantarum oqimining tsitometrik tahlili, kechikish vaqtini, hujayraning bo'linishini va shikastlanishini kuzatish uchun". Amaliy mikrobiologiyadagi xatlar. 25 (4): 295–9. doi:10.1046 / j.1472-765x.1997.00225.x. PMID  9351280.
  18. ^ Marzo AL, Kinnear BF, Leyk RA va boshq. (2000 yil dekabr). "Shishlarga xos CD4 + T hujayralari CTL vositachiligidagi o'smalarga qarshi immunitetda" litsenziyalashdan keyingi "muhim rol o'ynaydi". Immunologiya jurnali. 165 (11): 6047–55. doi:10.4049 / jimmunol.165.11.6047. PMID  11086036.
  19. ^ Jedema I, van der Verff NM, Barge RM, Willemze R, Falkenburg JH (2004 yil aprel). "Heterogen bo'lmagan maqsadli hujayra populyatsiyasi ichidagi leykemik prekursor hujayralarining sitotoksik T hujayralari tomonidan lizisga moyilligini aniqlash uchun CFSE asosida yangi tahlil". Qon. 103 (7): 2677–82. doi:10.1182 / qon-2003-06-2070. PMID  14630824. S2CID  1984056.
  20. ^ Hermans IF, Silk JD, Yang J va boshq. (2004 yil fevral). "VITAL tahlil: in vitro va in vivo jonli ravishda bir nechta maqsadlarga qarshi CTL va NKT vositachiligidagi sitotoksikani baholash uchun ko'p qirrali florometrik usul". Immunologik usullar jurnali. 285 (1): 25–40. doi:10.1016 / j.jim.2003.10.017. PMID  14871532.
  21. ^ Stambas J, Doherty PC, Turner SJ (2007 yil fevral). "A grippi virusiga xos effektor va xotira CD8 (+) T hujayralari uchun in vivo jonli sitotoksiklik chegarasi". Immunologiya jurnali. 178 (3): 1285–92. doi:10.4049 / jimmunol.178.3.1285. PMID  17237374.
  22. ^ Lyons AB, Doherty KV (2004 yil fevral). "Bo'yoqni suyultirish orqali hujayraning bo'linishini oqim sitometrik tahlili". Sitometriyadagi joriy protokollar. 9-bob: 9.11-birlik. doi:10.1002 / 0471142956.cy0911s27. ISBN  0471142956. PMID  18770808.
  23. ^ Quah BJ, Uorren HS, Parish CR (2007). "In vitro va in vivo jonli hujayra ichidagi lyuminestsent bo'yoq bilan karboksifloresin diatsetat süksinimidil efiri bilan limfotsitlar ko'payishini kuzatib borish". Tabiat protokollari. 2 (9): 2049–56. doi:10.1038 / nprot.2007.296. PMID  17853860.
  24. ^ Parish CR, Glidden MH, Quah BJ, Uorren HS (fevral 2009). "Limfotsitlar migratsiyasi va ko'payishini kuzatishda hujayra ichidagi lyuminestsent bo'yoq CFSE dan foydalanish". Immunologiyaning amaldagi protokollari. 4-bob: birlik 4.9. doi:10.1002 / 0471142735.im0409s84. ISBN  978-0471142737. PMID  19235770.