HUMARA tahlili - HUMARA assay

HUMARA tahlillari o'smaning klon kelib chiqishini aniqlashda eng ko'p ishlatiladigan usullardan biridir.[1][2] Usul asoslanadi X xromosomalarini inaktivatsiyasi va u boshqalarga ega bo'lishning afzalliklaridan foydalanadi metilatsiya HUMARA (inson uchun qisqacha) deb nomlangan genning holati androgen retseptorlari ) joylashgan X xromosoma. Bitta X xromosoma hujayrada inaktivlanganligini hisobga olsak,[3] undan hosil bo'lgan boshqa barcha hujayralar bir xil X xromosomasini inaktivatsiyaga ega bo'ladi, bu usul a ni ajratish uchun ajoyib vosita bo'ladi monoklonal ayol to'qimalarida poliklonal populyatsiya. HUMARA geni, xususan, uchta muhim xususiyatga ega bo'lib, uni maqsad uchun juda qulay qiladi.

1-) Gen X xromosomasida joylashgan va u normal ravishda metilatsiya bilan inaktivatsiyadan o'tadi embriogenez ayol go'dakning.[3] X xromosomasidagi ko'pchilik genlarning hammasi ham inaktivatsiyaga uchraganligi sababli, bu xususiyat muhim ahamiyatga ega.

2-) Inson Androgen retseptorlari geni allellar turli xil CAG takrorlanishiga ega.[4] Shunday qilib, qachon DNK tomonidan sog'lom ayol to'qimalardan kuchaytiriladi PCR genning ma'lum bir mintaqasi uchun jelda ikkita ajratilgan tasma ko'rish mumkin.

3-) PCR bilan kuchaytirilgan mintaqada ma'lum bir buyurtmalar mavjud bo'lib, ular uni hazm qilishga moyil qiladi. HpaII (yoki HhaI) fermenti metillanmagan bo'lsa.[4] Ushbu tafsilot tadqiqotchilarga metillangan allelni metillanmaganidan farqlash imkoniyatini beradi.

HUMARA genining ushbu fazilatlari tufayli ayol sutemizuvchilar organizmidan har qanday to'qimalarning klon kelib chiqishi aniqlanishi mumkin.

Asosiy jarayon quyidagicha amalga oshiriladi:

1-) to'qimalardan DNK ajratib olinadi.

2-) Izolyatsiya qilingan DNK tavsiya etilgan vaqt davomida (ya'ni bir kechada) maqbul sharoitda mos ferment bilan (masalan, HpaII) davolanadi.

3-) DNK tozalanadi va HUMARA genining ma'lum bir qismi PCR yordamida "mos" primerlar yordamida kuchaytiriladi (masalan, qarang: Ref.2)

4-) PCR mahsulotlarini jel orqali ishlagandan so'ng, jel ingl. Va natijalar shunga ko'ra tahlil qilinadi. Agar ikkita tasma aniq bo'lsa, o'rganilgan to'qima, ehtimol, poliklonal kelib chiqishi. Agar bitta tasma kuzatilsa, to'qima monoklonaldir, agar ikkita allelda aynan bir xil miqdordagi CAG takrorlanishi yoki bir xil inaktivatsiyaga ega bo'lgan turli hujayralar o'smani boshlamasa; Shunday qilib, aslida poliklonal bo'lsa-da, monoklonal ko'rinadi.

Shishning klonalligi to'g'risida xulosa qilish uchun DNKni bir xil odamning normal to'qimasidan foydalanganda yaxshiroq bo'ladi va ferment sifatida davolashsiz namuna ham nazorat sifatida kuchaytirilishi kerak. Agar fermentlarni davolashsiz oddiy to'qimalarda ham bitta band kuzatilsa, uni quyidagicha izohlash mumkin; bu odamda XO kabi genetik naqsh mavjud (bu imkoniyat fermentni davolashdan keyin tasmani ko'rish uchun istisno qilinishi mumkin, chunki agar haqiqatan ham XO namunaning genetik namunasi bo'lsa, unda metilatsiya bo'lmaydi, shuning uchun hazm bo'lgandan keyin hech qanday tasma ko'rinmasligi kerak Ferment bilan davolanishdan so'ng tasma ko'rilgan taqdirda, kuzatuv odamda aniq XAG takrorlanadigan ikkita X xromosomaga ega ekanligini anglatadi.) Oddiy to'qima uchun ikkita lentani ko'rganingizda (ikkala ferment ham davolangan va davolanmagan) va fermentlar bilan davolash qilingan o'simta namunalari uchun ikkita, ammo davolanmagan o'sma DNK uchun ikkita tasmalarni ko'rasiz, shunda siz albatta poliklonal o'simtani ko'rib chiqayapsiz. Ammo, agar siz fermentlarni davolashdan keyin bir xil miqdordagi bantlarni faqat bitta bant bilan ko'rsangiz, siz qiziqqan o'smaning monoklonal bo'lish ehtimoli juda katta. Ushbu oxirgi holatda monoklonallik aniq emas, chunki avval aytib o'tganimizdek, ikkala allelda ham bir xil -CAG- takrorlanish ehtimoli mavjud.

Adabiyotlar

  1. ^ Parsons, Barbara L. (2008-10-01). "Ko'p turli xil o'sma turlari poliklonal o'smaning kelib chiqishiga ega: dalillar va natijalar" (PDF). Mutatsion tadqiqotlar. 659 (3): 232–247. doi:10.1016 / j.mrrev.2008.05.004. ISSN  0027-5107. PMID  18614394.
  2. ^ Comertpay, Sabahattin; Pastorino, Sandra; Tanji, Mika; Mezzapelle, Rosanna; Strianese, Oriana; Napolitano, Andrea; Baumann, Fransin; Vaygel, Treysi; Fridberg, Jozef (2014-01-01). "Xavfli mezoteliyomaning klon kelib chiqishini baholash". Translational Medicine jurnali. 12: 301. doi:10.1186 / s12967-014-0301-3. ISSN  1479-5876. PMC  4255423. PMID  25471750.
  3. ^ a b Gartler, S. M.; Riggs, A. D. (1983-01-01). "Sutemizuvchilar X-xromosomalarini inaktivatsiyasi". Genetika fanining yillik sharhi. 17: 155–190. doi:10.1146 / annurev.ge.17.120183.001103. ISSN  0066-4197. PMID  6364959.
  4. ^ a b Allen, R. C .; Zogbi, H. Y .; Mozli, A. B.; Rozenblatt, X. M.; Belmont, J. W. (1992-12-01). "Polimorfik CAG takrorlanadigan odamning androgen-retseptorlari genida takrorlanadigan HpaII va HhaI maydonlarining metilatsiyasi X xromosomalarining inaktivatsiyasi bilan o'zaro bog'liq". Amerika inson genetikasi jurnali. 51 (6): 1229–1239. ISSN  0002-9297. PMC  1682906. PMID  1281384.