Xost hujayralarini qayta faollashtirish - Host-cell reactivation

Atama mezbon hujayralarni qayta faollashtirish yoki HCR ning omon qolishini tasvirlash uchun birinchi marta ishlatilgan UV nurlari - ultrabinafsha nurlari bilan davolash qilingan hujayralarga o'tkazilgan nurli bakteriofaglar.[1] Ushbu hodisa dastlab ikkala bakteriya va fag o'rtasidagi gomologik rekombinatsiya natijasi deb o'ylangan, ammo keyinchalik fermentativ tuzatish deb tan olingan.[2][3][4] Keyinchalik tahlilning modifikatsiyalari ishlab chiqildi, vaqtinchalik ekspression plazmidli DNK vektorlari ishlatildi abadiylashgan fibroblastlar,[5] va so'nggi paytlarda insonga tegishli limfotsitlar.[6]

The HCR plazmid reaktivatsiyasini tahlil qilish deb ham ataladigan tahlil, bilvosita ultrafiolet nurlanish natijasida transkripsiyada inhibe qilingan zarar bilan faollashtirilgan hujayra transkripsiyasini tiklash tizimini kuzatadi. plazmid. Sharti bilan; inobatga olgan holda UV nurlanishiga bog'liq DNK shikastlanishi sifatida ishlatiladi mutagen, hujayra nukleotid eksizyonini tiklashni qo'llaydi YO'Q yo'l, bu DNK spiralidagi buzilish bilan faollashadi.[1]

The Xost-hujayralarni qayta faollashtirish bo'yicha tahlil yoki HCR ni o'lchash uchun ishlatiladigan texnikadir DNKni tiklash ma'lum bir DNK o'zgarishi hujayralarining sig'imi. In HCR buzilmagan hujayraning ekzogen DNKni tiklash qobiliyatini tahlil qilish[7] Asosiy hujayra transfektsiya qilingan shikastlangan bilan plazmid o'z ichiga olgan muxbir gen, odatda lusiferaza, zarar tufayli o'chirilgan. Hujayraning plazmiddagi zararni tiklash qobiliyati, u hujayraga kiritilgandan so'ng, reportyor genini qayta faollashtirishga imkon beradi. Ushbu tahlilning oldingi versiyalari levomitsetin asetiltransferaza asosida ishlab chiqarilgan (Mushuk) gen,[5] ammo lusiferaza yordamida tahlil versiyasi muxbir gen 100 barobar ko'proq sezgir.[1]

Shuningdek qarang

Adabiyotlar

  1. ^ a b v Jonson JM, Latimer JJ (2005). "Transfektsiyaga asoslangan xost hujayrasini qayta faollashtirish yordamida DNK tiklanishini tahlil qilish". Molekulyar toksikologiya protokollari. Usullari Mol. Biol. 291. 321-35 betlar. doi:10.1385/1-59259-840-4:321. ISBN  1-59259-840-4. PMC  4860737. PMID  15502233.
  2. ^ Rupert CS, Harm W (1966). "Fotobiologik shikastlanishdan keyin reaktivatsiya". Adv. Radiat. Biol. Radiatsion biologiyaning yutuqlari. 2: 1–81. doi:10.1016 / B978-1-4832-3121-1.50006-2. ISBN  9781483231211. ISSN  0065-3292.
  3. ^ Smit KC, Martignoni KD (1976 yil dekabr). "Escherichia coli hujayralarini ultrabinafsha va x nurlanishining o'lim ta'siridan oldingi x nurlanish bilan himoya qilish: genetik va fiziologik tadqiqotlar". Fotokimyo. Fotobiol. 24 (6): 515–23. doi:10.1111 / j.1751-1097.1976.tb06868.x. PMID  798210.
  4. ^ Jons DT, Robb FT, Vuds DR (1980 yil dekabr). "Uzoq ultrabinafsha nurlanishidan keyin kislorodning Bacteroides fragilis omon qolishiga ta'siri". J. Bakteriol. 144 (3): 1179–81. doi:10.1128 / JB.144.3.1179-1181.1980. PMC  294787. PMID  7440505.
  5. ^ a b Protić-Sablich M, Kraemer KH (1985 yil oktyabr). "Bitta pirimidin dimer xeroderma pigmentozum hujayralarida transfekte qilingan genning ekspresiyasini inaktiv qiladi". Proc. Natl. Akad. Ilmiy ish. AQSH. 82 (19): 6622–6. Bibcode:1985 PNAS ... 82.6622P. doi:10.1073 / pnas.82.19.6622. PMC  391262. PMID  2995975.
  6. ^ Athas WF, Hedayati MA, Matanoski GM, Farmer ER, Grossman L (1991 yil noyabr). "Odamdagi aylanib yuruvchi limfotsitlarda DNKni tiklash bo'yicha tahlilni ishlab chiqish va sinovdan o'tkazish". Saraton kasalligi. 51 (21): 5786–93. PMID  1933849.
  7. ^ McCready, S. (2014). DNKni tiklashni o'lchash uchun immunoassay. P. Keohavong & S. G. Grant (nashr.), Molekulyar toksikologiya protokollari (1105-jild, 551-564-betlar). Humana Press. doi:10.1007/978-1-62703-739-6_38