Kodetsit - Kodecyte

A kodecyte (ko • de • cyte) bu a tirik hujayra bir yoki bir nechtasini kiritish orqali o'zgartirilgan (kodlangan) function-spacer-lipid konstruktsiyalari (FSL tuzilmalari)[1][2][3] yangi yoki yangi biologik, kimyoviy yoki texnologik funktsiyalarni olish. Hujayra lipid dumidan modifikatsiyalangan FSL tuzilishi tarkibiga kiritish bilipid membrana hujayraning

Barcha kodetsitlar odatdagi holatini saqlab qoladi muhimlik qo'shilgan FSL konstruktsiyalarining yangi funktsiyasini qo'lga kiritishda funktsionallik. Tarqoqlikning kombinatsiyasi biokompatibl ommaviy axborot vositalari, o'z-o'zidan hujayra membranalariga qo'shilishi va past toksikligi FSL tuzilmalari tadqiqot vositalari sifatida va yangi diagnostikani ishlab chiqish uchun mos va terapevtik ilovalar.

Texnologiya

Kungaboqarning tarkibiy o'xshashligi bo'shliqni to'ldirish modellari tanlangan FSL tuzilmalari. Chapdagi ikkita FSL konstruktsiyasi - FSL-peptidlar 1,2-dioleoyl-sn-glitsero-3-fosfoetanolamin (DOPE) lipidlari bo'lgan qisman karboksimetillangan oligoglisin (CMG2) ajratgichlariga asoslangan. Uchinchi va to'rtinchi konstruktsiyalar - FSL-biotin CMG asosida, lekin bilan YO'Q va sterol (b-oksikarbonilaminovalin kislotasi hosilasi xolesterin ) navbati bilan lipidlar. Oxirgi FSL konstruktsiyasi O (CH) orqali konjuge qilingan odatiy trisaxariddir2)3DHOP diatsil lipidining faollashtirilgan yog'li hosilasiga NH oralig'i.

Kode FSL konstruktsiyalari uchta komponentdan iborat;[3][4] funktsional qism (F), ajratuvchi (S) va a lipid (L).

Kodecytes yaratish uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan FSL konstruktsiyalaridagi funktsiya guruhlari quyidagilarni o'z ichiga oladi saxaridlar (shu jumladan ABO qon guruhi bilan bog'liq determinantlar,[4][5][6] sial kislotalar, gialuronin polisakkaridlari ), floroforlar,[7][8] biotin,[9] va qator peptidlar.[10][11][12][13][14][15][16][17][18]

FSL funktsional guruhlari haqida qo'shimcha ma'lumot: Function-Spacer-Lipid_construct § Funktsional_Gruplar

Kodetsitlar tabiiy hujayralarni o'zgartirish orqali yaratilgan bo'lsa ham, ular tabiiy hujayralardan farq qiladi. Masalan, lipid dumining tarkibi ta'sirida bo'lgan FSL konstruktsiyalari membranada lateral ravishda harakatchan bo'lib, ba'zi FSL konstruktsiyalari funktsional guruh (F) xususiyatlari tufayli klasterlashi ham mumkin.[1] FSL konstruktsiyalari membranada lipidli dum (L) orqali o'rnatilgandan so'ng, ular ishtirok etmaydi signal transduktsiya, lekin dastlabki majburiy hodisaning agonistlari yoki antagonistlari sifatida ishlashga mo'ljallangan bo'lishi mumkin. FSL konstruktsiyalari plazma membranasidan faol o'tmaydi, lekin hujayraga membrana invazinatsiyasi va endotsitoz orqali kirib borishi mumkin.[7]

Hujayralarning "kodlashi" barqaror (membrana tarkibiy qismlarining aylanish tezligiga bog'liq). FSL konstruktsiyalari faol bo'lmagan hujayralar (masalan, qizil qon tanachalari) membranasida hujayraning umr bo'yi lipidsiz muhitda saqlanishi sharti bilan qoladi.[7] Periferik qon aylanishida FSL konstruktsiyalari qizil hujayra kodetsitlaridan soatiga taxminan 1% tezlikda yo'qolishi kuzatiladi.[9][19] Dastlabki "kodlash" dozasi va aniqlash uchun zarur bo'lgan minimal daraja, muomalada "kodetsitlar" mavjudligini qancha vaqt nazorat qilish mumkinligini aniqlaydi. Qizil qon uchun "kodetsitlar" kichik sutemizuvchilarda vena ichiga yuborilgandan keyin 3 kungacha "kodetsitlar" mavjudligini ishonchli nazorat qilish isbotlangan.[9]

FSL konstruktsiyasining ajratuvchisi (S) sarum antikorlari bilan o'zaro reaktivlikning ahamiyatsizligi uchun tanlangan, shuning uchun kodetsitlar suyultirilmagan sarum bilan ishlatilishi mumkin. FSL oralig'ining uzunligini 1,9 dan 7,2 gacha oshirish orqali nm kodetsitlar tahlilida qizil hujayraning aglutinatsiyasiga asoslangan tahlillarda sezgirlik ikki baravar yaxshilanishi ko'rsatilgan. Biroq, bo'shliq hajmini 7,2 dan 11,5 nmgacha oshirish, yanada yaxshilanishga olib kelmadi.[1]

A plazma membranasi FSL konstruktsiyalari bilan o'zgartirilgan (kungaboqar o'xshashligi bo'yicha), kodetsitli membranani yaratgan.

Texnologik video

Kode Technology qanday ishlashini tushuntirib beradigan oddiy videoni ko'rish uchun quyidagi havolani bosing: https://www.youtube.com/watch?v=TIbjAl5KYpA

Metodika

Kodetsitlarni tayyorlash. Faqatgina hujayralarni FSL eritmasi bilan aralashtiring (1 yoki undan ko'p FSL o'z ichiga oladi) va 37 ° C da (yoki 4 ° S gacha bo'lgan haroratda) 10-120 daqiqa davomida inkübe qiling. Konstruktsiyalar o'z-o'zidan membranaga qo'shiladi va boshqa qadamlar talab qilinmaydi.

FSL tuzilmasi, echimida (sho'r suv ) va aloqada bo'lganda, o'z-o'zidan hujayra membranalariga qo'shiladi.[20] Metodologiya 1-1000 oralig'ida FSL konstruktsiyalari (lar) ning echimini tayyorlashni o'z ichiga oladi mg /ml, kodetsitda mavjud bo'lgan antigen miqdorini aniqlashda ishlatiladigan konsentratsiya bilan. Kodetsitning tashqi qismidagi antigen darajasini boshqarish qobiliyati sifat nazorati sezgirligini ishlab chiqarishga imkon berdi[2] va serologik aglutinatsiya reaktsiyalarining barcha turlarini o'z ichiga olgan serologik ta'lim to'plamlari.[21] Haqiqiy kontsentratsiya konstruktsiyaga va membranada zarur bo'lgan qurilish miqdoriga bog'liq bo'ladi. FSL eritmasining bir qismi hujayralarning bir qismiga qo'shiladi (100% gacha) to'xtatib turish ) va ular o'zgartirilgan hujayralarning haroratga mosligiga qarab belgilangan haroratda 4-37 ° C (39-99 ° F) oralig'ida inkübe qilinadi. Harorat qancha yuqori bo'lsa, membranaga FSL qo'shilish tezligi tezroq bo'ladi. Qizil qon hujayralari uchun 37 ° C haroratda 2 soat davomida inkubatsiya qilish> 95% FSL qo'shilishiga erishadi va kamida 50% kiritishga 20 daqiqa ichida erishiladi. Umuman olganda, uglevodlarga asoslangan FSL eritrotsitlarga kiritish uchun xona haroratida 4 soat yoki 4 ° C da 20 soat davomida inkubatsiya qilish 37 ° S da bir soatga o'xshaydi.[20] Natijada paydo bo'lgan kodecyteslarni yuvish talab qilinmaydi, ammo kodlash jarayonida ortiqcha FSL konstruktsiyasidan foydalanilsa, ushbu parametr ko'rib chiqilishi kerak.

Kodecytes ham yaratilishi mumkin jonli ravishda konstruktsiyalarni to'g'ridan-to'g'ri muomalaga kiritish orqali.[19] Ammo bu jarayon konstruktsiyalar bilan aloqada bo'lgan barcha hujayralarni o'zgartiradi va odatda nisbatan sezilarli darajada ko'proq tuzilishni talab qiladi in vitro tayyorgarlik, chunki FSL konstruktsiyalari erkin lipidlar bilan birlashishi afzaldir.[19]The jonli ravishda kodecytes yaratish maqsadga muvofiq emas va FSL konstruktsiyalari barcha hujayralarga maxsus bo'lmagan holda kiritiladi, lekin ba'zi hujayralar uchun afzalliklarni ko'rsatishi mumkin.

Diagnostik serologik tahlillar[4] shu jumladan oqim sitometriyasi[5] va elektron mikroskopni skanerlash odatda "kodetsitlar" va o'zgartirilmagan hujayralar orasidagi farqni ko'ra olmaydi. Biroq, tabiiy hujayralar bilan taqqoslaganda, ular orasida farq bor IgM va IgG funktsional guruh (F) monomerik peptid antigeni bo'lganida antikor reaktivligi. IgM antikorlari FSL peptidlari bilan tuzilgan kodetsitlar bilan yomon reaksiyaga kirishadi.[10][17] Bundan tashqari, FSL konstruktsiyalari cheklangan antigen / epitopga ega bo'lishi mumkin va agar FSL konstruktsiyasi va monoklonal antikor bir-birini to'ldirmasa, monoklonal antikor bilan reaksiyaga kirishmasligi mumkin.[10][17]

Kodetsitlarni standart gistologik metodlar yordamida o'rganish mumkin. Kodetsitlar "kodlash" dan so'ng FSL konstruktsiyasining funktsional qismi (F) fiksator bilan mos kelishiga qarab tuzatilishi mumkin. Shu bilan birga, muzlatilgan kesilgan yoki formalin bilan biriktirilgan muzlatilgan kesilgan to'qimalar talab qilinadi, chunki lipid asosidagi FSL konstruktsiyalari (va boshqa glikolipidlar) parafin ko'milgan namunalardagi "kodetsitlardan" defarafinatsiya bosqichlarida yuviladi.[20]

Nomenklatura

Kodlangan membranalar tuzilishi va FSL kontsentratsiyasi bilan tavsiflanadi (ichida mg /ml ) ularni yaratish uchun ishlatiladi.[20] Masalan, FSL-A ning 100 mg / ml eritmasi bilan yaratilgan kodecytes A100 kodecytes deb nomlanadi. Agar bir nechta FSL konstruktsiyalari ishlatilgan bo'lsa, unda ta'rif mos ravishda kengaytiriladi, masalan. A100 + B300 kodetsitlari tarkibida 100 mg / ml FSL-A eritmasi va 300 mg / ml FSL-B eritmasi bo'lgan eritma hosil bo'ladi. "+" Belgisi qurilish aralashmalarini ajratish uchun ishlatiladi, masalan. A100 + B300. Agar FSL konsentratsiyasi doimiy bo'lsa, u holda terminologiyaning mg / ml tarkibiy qismi tushishi mumkin, masalan. Kodetsitlar. Shu bilan bir qatorda FSL-A va FSL-biotin kabi bir-biriga bog'liq bo'lmagan tuzilmalar A + biotin kodetsitlarini yaratadi va hokazo. Agar bir xil tadqiqotda turli hujayralar ishlatilsa, u holda hujayra turini nomga kiritish tavsiya etiladi, masalan. RBC A100 kodecytes va boshqalar WBC A100 kodecytes yoki trombotsitlar A100 kodecytes va boshqalar.

Ilovalar

Uchun Kode Technology ishlatilgan in vitro murin modifikatsiyasi embrionlar, spermatozoa, zebra baliqlari, epiteliy /endometrial hujayralar va qizil qon hujayralari[3][4][5][8][11][12][22] uyali sifat nazorati tizimlarini yaratish,[2][3][10] serologik to'plamlar (o'qitish),[21][23] kamdan-kam antigen ifoda qilish, hujayralarga yuqumli belgilar qo'shish,[3][13][18] o'zgartirilgan hujayraning yopishishi / ta'sir o'tkazish / ajratish / immobilizatsiya,[3][7][9] va yorliqlash.[5][8] Bu ham bo'ldi tomir ichiga uchun infuziya qilingan jonli ravishda qon hujayralarining modifikatsiyasi va qon aylanishini zararsizlantirish antikorlar[3][19][24] va jonli ravishda zebrafishdagi aylanma suyak iligi kodetsitlarini tasvirlash.[25] Kode FSL konstruktsiyalari shuningdek o'zgartirilgan tsellyuloza, qog'oz,[22] kremniy, polimerlar, tabiiy tolalar, shisha va metallar va bu sirtlarni markalashda ultra tezkor ekanligi isbotlangan.[3][26]

Shuningdek qarang

Adabiyotlar

  1. ^ a b v Korchagina, Elena; Tuzikov, Aleksandr; Formanovskiy, Andrey; Popova, Inna; Genri, Stiven; Bovin, Nikolay (2012). "Glikan lipidli konstruktsiyalari bilan hujayra membranasi glikolandpastalarini yaratish yo'lida". Karbongidrat tadqiqotlari. 356: 238–46. doi:10.1016 / j.carres.2012.03.044. PMID  22551471.
  2. ^ a b v Genri, Stiven M (2009). "Laboratoriya sifatini nazorat qilish uchun qizil qon hujayralarini modifikatsiyasi". Gematologiyaning hozirgi fikri. 16 (6): 467–472. doi:10.1097 / MOH.0b013e328331257e. PMID  19680123.
  3. ^ a b v d e f g h Korchagina, E. Y .; Genri, S. M. (2015-07-16). "Glikolipidga o'xshash sintetik tuzilmalar glikobiologiya tadqiqotlari, diagnostikasi va potentsial terapevtik vositalar sifatida". Biokimyo (Moskva). 80 (7): 857–871. doi:10.1134 / S0006297915070068. ISSN  0006-2979. PMID  26542000.
  4. ^ a b v d Kadr, Tom; Kerol, Tim; Korchagina, Elena; Bovin, Nikolay; Genri, Stiven (2007). "Qizil qon hujayralari membranalarining sintetik glikolipid modifikatsiyasi". Qon quyish. 47 (5): 876–882. CiteSeerX  10.1.1.494.2776. doi:10.1111 / j.1537-2995.2007.01204.x. PMID  17465953.
  5. ^ a b v d Xult, Annika K; Frame, Tim; Chesla, Skott; Genri, Stiven; Olsson, Martin L (2012). "O'zgaruvchan miqdordagi FSL-A va B konstruktsiyalari bilan modifikatsiyadan so'ng tabiiy ravishda mavjud bo'lgan ABO kichik guruhlarini taqlid qiluvchi qizil qon hujayralarining oqim sitometriyasini baholash". Qon quyish. 52 (2): 247–251. doi:10.1111 / j.1537-2995.2011.03268.x. PMID  21812783.
  6. ^ Genri SM. Sintetik glikolipidlar (KODETM CAE) bilan qizil hujayralar yuzasini ABO analitik sezgirligini boshqarish va kseno-modifikatsiyalangan hujayralarni yaratish uchun muhandislik. (taklif qilingan ma'ruza) Transplantatsiyadagi ABO mos kelmasligi bo'yicha 2-Xalqaro simpozium, Göteborg, Shvetsiya, 2005 Ksenotransplantatsiya 2005; 12 (5): 356
  7. ^ a b v d Bleyk D, Lan A, Sevgi D, Bovin N, Genri S (2010). "Fluorhofor-kodecytes - in vitro va in vivo jonli tahlillar uchun lyuminestsent funktsiya-spacer-lipid (FSL) o'zgartirilgan hujayralar". FEBS jurnali. 277 (1): 37–271. doi:10.1111 / j.1742-4658.2010.07680.x. hdl:10292/2142.
  8. ^ a b v Ki, Katrina K.; Gul, Robert L.; Faddi, Xelen M.; Dekan, Melinda M. (2016 yil 7-yanvar). "Fluoresan konjuge funktsiyasi-spacer-lipid konstruktsiyalarining qizil qon hujayralari membranasiga qo'shilishi, ekvivo jonli saqlash muddati davomida belgilangan hujayralarni aniqlashni osonlashtiradi" (PDF). Immunologik usullar jurnali. 429: 66–70. doi:10.1016 / j.jim.2016.01.003. PMID  26773455.
  9. ^ a b v d Oliver, Kerolin; Bleyk, Debbi; Genri, Stiven (2011). "Transfüzyon reaktsiyalarini modellashtirish va kodetsitlar bilan in vivo jonli hujayralarni hayotini bashorat qilish". Qon quyish. 51 (8): 1723–1730. doi:10.1111 / j.1537-2995.2010.03034.x. PMID  21303367.
  10. ^ a b v d Xitkot, Damin; Carrol, Tim; Vang, Juy-Jen; Gul, Robert; Rodionov, Igor; Tuzikov, Aleksandr; Bovin, Nikolay; Genri, Stiven (2010). "Peptidlarni eritrotsitlarga qo'shish natijasida hosil bo'lgan yangi antitellarni skrining hujayralari, MUT + Mur kodetsitlari". Qon quyish. 50 (3): 635–641. doi:10.1111 / j.1537-2995.2009.02480.x. PMID  19912581.
  11. ^ a b Heathcote, D; Gul, R; Genri, S (2008). "Yangi alloantibod skrining hujayralarini yaratish - KODE texnologiyasidan foydalangan holda odamning qizil hujayralariga peptid antigenlarini qo'shishning birinchi misoli. ISBT Mintaqaviy Kongressi, Makao SAR Xitoy, 2008 yil". (P-303) "deb nomlangan. Vox Sanguinis. 95 (Qo'shimcha 1): 174.
  12. ^ a b Gul, R; Lin P-H, Heathcote D; Chan, M; Teo, D; Selkirk, A; Cho'pon, R; Genri, S (2008). "KODE peptid konstruktsiyalarini qizil hujayra membranalariga kiritish: MNS qon guruhi antijenlarining sun'iy variantini yaratish. ISBT Mintaqaviy Kongressi, Makao SAR Xitoy, 2008". (P-396) ". Vox Sanguinis. 95 (Qo'shimcha 1): 203-204.
  13. ^ a b Chesla, S; Genri, S; Eatz, R; Sinor, L (2010). "KODE texnologiyasidan foydalangan holda qattiq fazali sifiliz tekshiruvi". Qon quyish. 50: 196A - 197A. doi:10.1111 / j.1537-2995.2010.02833_1.x. PMID  20815863.
  14. ^ Komarraju S, Chesla S, Bovin N, Genri S (2010). "Sifilis-kodetsitlar - sifiliz antikorlarini sezgir va aniq aniqlashga qodir bo'lgan yangi funktsional-spacer-lipid (FSL) o'zgartirilgan qizil hujayralar". FEBS jurnali. 277 (S1): 97-98. doi:10.1111 / j.1742-4658.2010.07680.x. hdl:10292/2142.
  15. ^ Nadarajan, V.S .; Laing, A. A .; Saad, S. M .; Usin, M (2011). "Ko'p millatli Janubiy va Sharqiy Osiyo kasal populyatsiyasida qizil qon hujayralari antikorlarining tarqalishi va o'ziga xosligi va uni aniqlashda yangi MUT + Mur + kodetsitlaridan foydalanish ta'siri". Vox Sanguinis. 102 (1): 65–71. doi:10.1111 / j.1423-0410.2011.01507.x. PMID  21592136.
  16. ^ Genri, Stiven; Rodionov, Igor (2012). FSL-RFG (Maleimide) FSL qurilish to'plamining texnik byulleteni. Scholarly Commons. hdl:10292/2241.
  17. ^ a b v Genri, Stiven; Komarraju, Sarvani; Xitkot, Damin; Rodinov, Igor L (2011). "Miltenberger kodetsitlarini yaratish uchun peptidga asoslangan FSL konstruktsiyalarini loyihalash". ISBT ilmiy seriyasi. 6 (2): 306–312. doi:10.1111 / j.1751-2824.2011.01505.x.
  18. ^ a b Georgakopulos, T; Komarraju, Sarvani; Genri, Stiven; Bertolini, Jozef (2011). "Sintetik Funktsiya-Spacer-Lipid konstruktsiyalari bilan hosil bo'lgan CMV antigen bilan qoplangan qizil qon hujayralari yordamida Fc funktsiyasini takomillashtirilgan tahlili". Vox Sanguinis. 102 (1): 72–78. doi:10.1111 / j.1423-0410.2011.01512.x. PMID  21749406.
  19. ^ a b v d Oliver, Kerolin; Bleyk, Debbi; Genri, Stiven (2011). "In vivo jonivorlar modelidagi anti-A-ni antigen bilan mos kelmaydigan qizil hujayralarni muvaffaqiyatli transfüzyonu va zararsizlantirish". Qon quyish. 51 (12): 2664–2675. doi:10.1111 / j.1537-2995.2011.03184.x. PMID  21599675.
  20. ^ a b v d Bleyk, Debbi A; Bovin, Nikolay V; Bess, Dan; Genri, Stiven M (2011). "FSL Konstruktsiyalari: Hujayra / Virion sirtlarini biologik belgilar bilan ularning hayotiyligiga ta'sir qilmasdan o'zgartirishning oddiy usuli". Vizual eksperimentlar jurnali. 54 (e3289). doi:10.3791/3289. PMC  3211133. PMID  21847082.
  21. ^ a b Genri, Stiven; Perri, Xolli (2012). FSL-A + B (tri) serologik o'qitish vositalarining texnik byulleteni. Scholarly Commons. hdl:10292/2827.
  22. ^ a b Barr, Keti; Korchagina, Elena; Ryzhov, Ivan; Bovin, Nikolay; Genri, Stiven (2014-10-01). "ABO monoklonal reagentlarining A va B tipidagi funktsiyalari-spacer-lipid konstruktsiyalari bilan kodetsitlarda va qog'ozga bosilgan siyohli struktrda xaritada solish". Qon quyish. 54 (10): 2477–2484. doi:10.1111 / trf.12661. ISSN  1537-2995. PMID  24749871.
  23. ^ Perri, Xolli; Genri, Stiven (2015-06-01). "Talabalarni serologik reaktsiyalarni baholashga o'rgatish o'z-o'zini samaradorligini anglash qobiliyatini oshirdi va serologik reaktsiyalarni tanib olish qobiliyatini oshirdi, ammo baholashning aniqligini pasaytirdi". Qon quyish. 55 (6pt2): 1572-1579. doi:10.1111 / trf.12985. ISSN  1537-2995. PMID  25564758.
  24. ^ Genri, Stiven; Barr, Keti; Oliver, Kerolin. "Transfüzyon reaktsiyalarini kodetsitlar bilan modellashtirish va Funktsiya-Spacer-Lipid konstruktsiyalari bilan ABO mos kelmaydigan transfüzyonu yoqish" (Matbuotda). ISBT ilmiy seriyasi. Iqtibos jurnali talab qiladi | jurnal = (Yordam bering)
  25. ^ Chet el, C-C; Bleyk, D; Genri, S; Sevgi, D R (2012). "Floresan funktsiyasi-Spacer-Lipid konstruktsiyasining yorlig'i zebrafish (Danio rerio) da hujayraning migratsiyasi va xatti-harakatlarini real vaqtda in vivo jonli tasvirlash imkonini beradi". Floresan jurnali. 22 (4): 1055–63. doi:10.1007 / s10895-012-1043-3. PMID  22434405.
  26. ^ Uilyams, Eleanor; Barr, Keti; Korchagina, Elena; Tuzikov, Aleksandr; Genri, Stiven; Bovin, Nikolay (2016-01-16). "Biologik bo'lmagan sirtlarning ultra tezkor gliko-qoplamasi". Xalqaro molekulyar fanlar jurnali. 17 (1): 118. doi:10.3390 / ijms17010118. PMC  4730359. PMID  26784187.

Tashqi havolalar

  • [1] Kodeycte.com
  • [2] Kode Technology qanday ishlaydi
  • [3] Kodetsitlarning qo'llanilishi
  • [4] CSL kodetsitlarni qo'llash