Massiv parallel ketma-ketlik - Massive parallel sequencing - Wikipedia

Massiv parallel ketma-ketlik yoki massiv parallel ketma-ketlik yuqori mahsuldorlik yondashuvlaridan biri DNKning ketma-ketligi massiv parallel qayta ishlash kontseptsiyasidan foydalanish; u ham deyiladi keyingi avlod ketma-ketligi (NGS) yoki ikkinchi avlod ketma-ketligi. Ushbu texnologiyalarning ba'zilari 1994-1998 yillarda paydo bo'lgan [1][2][3][4][5] va 2005 yildan beri sotuvga chiqarila boshlandi. Ushbu texnologiyalar miniatyura qilingan va parallellashtirilgan platformalardan foydalanib, har bir asbob-uskuna uchun 1 milliondan 43 milliardgacha qisqa o'qishni (har biri 50-400 tagacha) ketma-ketlikda joylashtiradi.

Ko'pgina NGS platformalari muhandislik konfiguratsiyasi va ketma-ketlik kimyosi bilan farq qiladi. Ular keng parallel ketma-ketlikning texnik paradigmasini fazoviy ajratilgan, klonal ravishda kuchaytirilgan holda bo'lishadilar DNK andozalar yoki bitta DNK molekulalari oqim xujayrasi. Ushbu dizayn dizayndan juda farq qiladi Sanger ketma-ketligi - shuningdek, kapillyar sekvensiya yoki birinchi avlod sekvensiya deb nomlanadi - bu asoslanadi elektroforetik individual ketma-ketlik reaktsiyalarida ishlab chiqarilgan zanjirni tugatish mahsulotlarini ajratish.[6]

NGS platformalari

Savdoga qo'yilgan NGS platformalari bilan DNK sekvensiyasi odatda quyidagi bosqichlarda amalga oshiriladi. Birinchidan, DNK sekvensiyasi kutubxonalari tomonidan klon amplifikatsiya orqali hosil bo'ladi PCR in vitro. Ikkinchidan, DNKning ketma-ketligi sintez, shunday qilib DNK ketma-ketligi qo'shilishi bilan aniqlanadi nukleotidlar zanjir bilan tugatish kimyosi orqali emas, balki bir-birini to'ldiruvchi yo'nalishga. Uchinchidan, fazoviy ajratilgan, kuchaytirilgan DNK shablonlari bir vaqtning o'zida massiv parallel ravishda bir-biridan fizikaviy ajratish pog'onasini talab qilmasdan tartiblangan. Ko'pgina NGS platformalarida ushbu qadamlar bajarilgan bo'lsa-da, ularning har biri boshqacha strategiyadan foydalanadi.[7]

Sekvensiya reaktsiyalarining NGS parallelligi yuzlab megabazalarni nukleotidlar ketma-ketligi gigabazalariga bitta asbobda o'qishda hosil qiladi. Bu mavjud bo'lgan ketma-ketlik ma'lumotlarini keskin oshirishga va biomedikal fanlarda genomlarni tartiblashtirishning tubdan o'zgarishiga imkon berdi.[8]Yangi paydo bo'lgan NGS texnologiyalari va asboblari ketma-ketlik narxining boshiga 1000 dollarga yaqinlashishiga sezilarli hissa qo'shdi. genomlar ketma-ketligi.[9][10]

2014 yildan boshlab ommaviy ravishda ketma-ket ketma-ket platformalar sotuvda mavjud va ularning xususiyatlari jadvalda umumlashtirilgan. NGS texnologiyalarining sur'atlari tez sur'atlar bilan rivojlanib borayotganligi sababli, texnik xususiyatlar va narxlar o'zgaruvchan.

An Illumina HiSeq 2000 ketma-ketlik mashinasi
NGS platformalari
PlatformaShablonni tayyorlashKimyoMaksimal o'qish uzunligi (asoslar)Ish vaqti (kun)Ishlash uchun maksimal Gb
Roche 454Klon-emPCRPirosekvensiya400‡0.420.40-0.60
GS FLX titaniumKlon-emPCRPirosekvensiya400‡0.420.035
Illumina MiSeqKlonli ko'prikni kuchaytirishQayta tiklanadigan bo'yoq terminatori2x3000.17-2.715
Illumina HiSeqKlonli ko'prikni kuchaytirishQayta tiklanadigan bo'yoq terminatori2x1500.3-11[11]1000[12]
Illumina Genom analizatori IIXKlonli ko'prikni kuchaytirishQayta tiklanadigan bo'yoq terminatori[13][14]2x1502-1495
Hayotiy texnologiyalar SOLiD4Klon-emPCROligonukleotid 8-mer zanjirli bog'lanish[15]20-454-735-50
Ion Proton hayot texnologiyalari[16]Klon-emPCRMahalliy dNTPlar, protonlarni aniqlash2000.5100
To'liq GenomikaGridli DNK-nanobollarOligonukleotid 9-mer zanjirsiz bog'lash[17][18][19]7x10113000
Helicos Bioscience HeliscopeYagona molekulaQayta tiklanadigan bo'yoq terminatori35‡825
Tinch okeani biologlari SMRTYagona molekulaFosforli floresan nukleotidlar10,000 (N50 ); 30,000+ (maksimal)[20]0.080.5[21]


Bir martalik ketma-ketlik uchun ishlash vaqtlari va har bir gigabaza (Gb) chiqishi qayd etiladi. Juft uchli ketma-ketlikni bajarishda ish vaqti va natijalari taxminan ikki baravar ko'p. ‡ Roche 454 va Helicos Bioscience platformalari uchun o'rtacha o'qish uzunligi.[22]

NGS uchun shablonlarni tayyorlash usullari

NGS reaktsiyalari uchun shablonlarni tayyorlashda ikkita usul qo'llaniladi: bitta DNK molekulalaridan kelib chiqadigan kuchaytirilgan shablonlar va bitta DNK molekulalari shablonlari, bitta lyuminestsentsiya hodisalarini aniqlay olmaydigan ko'rish tizimlari uchun DNK shablonlarini kuchaytirish zarur. Eng keng tarqalgan uchta amplifikatsiya usuli - bu emulsiya PCR (emPCR), dumaloq aylana va qattiq fazali amplifikatsiya. Shablonlarning yakuniy taqsimoti fazoviy tasodifiy yoki katakchada bo'lishi mumkin.

Emulsiya PCR

Yilda emulsiya PCR usullari, a DNK kutubxonasi birinchi navbatda genomik DNKning tasodifiy parchalanishi orqali hosil bo'ladi. Bir zanjirli DNK fragmentlari (shablonlar) munchoqlar yuzasiga adapter yoki ulagichlar bilan biriktirilgan va bitta munchoq DNK kutubxonasidagi bitta DNK fragmentiga biriktirilgan. Boncuklar yuzasi o'z ichiga oladi oligonukleotid DNK fragmentlarini bog'laydigan adapterlarni to'ldiruvchi ketma-ketlikdagi problar. Keyin boncuklar suv-moy emulsiyasi tomchilariga bo'linadi. Suvli moy moyi emulsiyasida bitta boncuk ushlagan tomchilarning har biri PCR hisoblanadi mikroreaktor bitta DNK shablonining kengaytirilgan nusxalarini ishlab chiqaradi.[23][24][25]

Panjara doirasi nanobollari

Yagona DNK molekulalarining populyatsiyasining ko'payishi dumaloq doirani kuchaytirish eritmada immobilizatsiya qilinadigan DNKlardan kichikroq o'lchamdagi dog'lar panjarasida ushlab turish.[26][27][28][29]

DNK koloniyasini yaratish (ko'prikni kuchaytirish)

Oldinga va teskari primerlar oqim zichlagichidagi slaydga yuqori zichlikda kovalent ravishda biriktiriladi. Astarlarning tayanch ustidagi shablonga nisbati kuchaytirilgan klasterlarning sirt zichligini belgilaydi. Oqim xujayrasi uchun reaktivlar ta'sir ko'rsatadi polimeraza asosli kengaytma va priming bog'langan bo'lakning "ko'priklari" ning erkin / distal uchi sifatida to'ldiruvchi qismga aylanadi. oligo yuzasida. Takrorlangan denaturatsiya va kengayish natijasida oqim hujayrasi yuzasida millionlab alohida joylarda DNK bo'laklarini lokalize amplifikatsiyasi mavjud. Qattiq fazali amplifikatsiya 100-200 million fazoviy ajratilgan shablon klasterlarni hosil qiladi va erkin uchlarini ta'minlaydi, keyinchalik ketma-ketlik reaktsiyasini boshlash uchun universal sekvensiya primeri gibridlanadi.[23][24] Ushbu texnologiya 1997 yilda Paskal Mayer, Erik Kavashima va Loran Farinelli tomonidan Glaxo-Welcome kompaniyasining Jeneva biotibbiyot tadqiqot institutidan (GBRI) patent olgan.[3][4] va 1998 yilda birinchi marta ommaviy ravishda namoyish etildi.[5] 1994 yilda Kris Adams va Stiv Kron shunga o'xshash, ammo "ko'prikni kuchaytirish" deb nomlangan klon bo'lmagan sirtni kuchaytirish uslubiga patent topshirdi.[2] 1997 yilda Cherch va Mitra tomonidan klon amplifikatsiya uchun moslashtirilgan.[26][27]

Bitta molekulali shablonlar

DNKni kuchaytirishni talab qiladigan protokollar ko'pincha amalga oshirishda noqulay va ketma-ketlikdagi xatolarni keltirib chiqarishi mumkin. Bir molekulali shablonlarni tayyorlash ancha sodda va kuchaytirilgan shablonlarda xatolarni keltirib chiqaradigan PCR ni talab qilmaydi. ATga boy va GC ga boy maqsadli ketma-ketliklar tez-tez kuchaytiruvchi tarafkashlikni namoyish etadi, bu ularning genom hizalamalari va yig'ilishlarida kam namoyish qilinishiga olib keladi. Yagona molekula shablonlari odatda kamida uchta turli yondashuvlardan biri yordamida qattiq tayanchlarda immobilizatsiya qilinadi. Birinchi yondashuvda fazoviy taqsimlangan individual primer molekulalar kovalent ravishda qattiq tayanchga biriktiriladi. Dastlabki materialni tasodifiy kichik o'lchamlarga (masalan, ~ 200-250 bp) bo'laklash va fragment uchlariga umumiy adapterlarni qo'shish yo'li bilan tayyorlangan shablon keyinchalik immobilizatsiya qilingan primerga gibridlanadi. Ikkinchi yondashuvda, fazoviy taqsimlangan bitta molekulali shablonlar kovalent ravishda immobilizatsiya qilingan primerlardan bitta zanjirli, bitta molekulali shablonlarni astarlash va kengaytirish orqali qattiq tayanchga biriktiriladi. Keyinchalik shablonga umumiy primer gibridlanadi va har qanday usulda DNK polimeraza NGS reaktsiyasini boshlash uchun immobilizatsiya qilingan primer shablon konfiguratsiyasiga ulanishi mumkin. Yuqoridagi ikkala yondashuv Helicos BioScience tomonidan qo'llaniladi. Uchinchi yondashuvda fazoviy taqsimlangan yagona polimeraza molekulalari qattiq tayanchga biriktirilgan bo'lib, unga astarlangan shablon molekulasi bog'langan. Ushbu yondashuv Pacific Bioscience tomonidan qo'llaniladi. Ushbu texnikada katta DNK molekulalaridan (o'n minglab bazaviy juftlarga qadar) foydalanish mumkin va dastlabki ikki yondashuvdan farqli o'laroq, uchinchi yondashuvni real vaqtda usullar bilan ishlatish mumkin, natijada o'qish uzunligi uzoqroq bo'ladi.

Tartiblash yondashuvlari

Pirosekvensiya

1996 yilda, Pål Nyrén va uning shogirdi Mostafa Ronagi yilda Qirollik Texnologiya Institutida Stokgolm ularning uslubini nashr etdi pirosekvensiya.[1] Pirosekvansiya - noorganik moddalarni chiqarishni o'lchaydigan elektroforetik bo'lmagan, biolyuminesans usuli. pirofosfat bir qator fermentativ reaktsiyalar yordamida mutanosib ravishda ko'rinadigan nurga aylantirish orqali. DNK sintezini tugatish uchun modifikatsiyalangan nukleotidlardan foydalanadigan boshqa ketma-ketlik yondashuvlaridan farqli o'laroq, pirosekvensiya usuli DNK polimerazasini bitta qo'shilishi bilan boshqaradi dNTP Qo'shimcha dNTP tarkibiga kirganda DNK polimeraza primerni kengaytiradi va pauzalarni to'xtatadi. DNK sintezi tarqatish tsiklida navbatdagi qo'shimcha dNTP qo'shilishidan keyin qayta tiklanadi. Yorug'lik cho'qqilarining tartibi va intensivligi asosiy DNK ketma-ketligini ochib beradigan oqim jadvallari sifatida qayd etiladi.[30]

Qayta tiklanadigan terminatorlar kimyosi bo'yicha ketma-ketlik

Ushbu yondashuv nukleotid qo'shilishi, lyuminestsentsiya tasviri va dekolmani o'z ichiga olgan tsiklli usulda qaytariladigan terminator bilan bog'langan dNTPlardan foydalanadi, har bir dNTP qo'shilganda flüoresan etiketli terminator tasvirlanadi va keyingi bazani birlashtirishga imkon berish uchun ajratiladi.Bu nukleotidlar kimyoviy bloklangan. Shunday qilib, har bir qo'shilish noyob voqea. Tasvirlash bosqichi har bir tayanch qo'shilish bosqichidan keyin amalga oshiriladi, so'ng bloklangan guruh kimyoviy yo'l bilan olib tashlanib, har bir ipni DNK-polimeraza bilan keyingi qo'shilish uchun tayyorlaydi. Ushbu qadamlar ketma-ketligi foydalanuvchi tomonidan belgilangan asboblar sozlamalari bo'yicha aniqlangan tsikllar soni bo'yicha davom etadi. 3 'blokirovka qiluvchi guruhlar dastlab yoki fermentativ sifatida o'ylab topilgan[31] yoki kimyoviy reversal[13][14] Kimyoviy usul Solexa va Illumina mashinalari uchun asos bo'lib xizmat qiladi. Qayta tiklanadigan terminatorli kimyo bo'yicha ketma-ketlik Illumina / Solexa tomonidan ishlatiladigan to'rt rangli tsikl yoki Helicos BioScience tomonidan ishlatiladigan bitta rangli tsikl bo'lishi mumkin. "Virtual Terminatorlar", bu blokirovka qiluvchi ikkinchi nukleosid analogiga ega blokirovka qilingan terminatorlar. Ushbu terminatorlar guruhlarni to'xtatish yoki inhibe qilish uchun tegishli modifikatsiyalarga ega, shuning uchun bitta asos qo'shilgandan so'ng DNK sintezi tugaydi.[24][32][33]

Ligaza fermentlari vositasida ketma-ket ligatsiya

Ushbu yondashuvda ketma-ketlikni kengaytirish reaktsiyasi polimerazalar tomonidan emas, balki DNK tomonidan amalga oshiriladi ligaza yoki bitta bazali kodlangan problar yoki ikkita bazali kodlangan problar. Eng sodda shaklda lyuminestsent yorliqli zond astarlangan shablonga tutashgan bir-birini to'ldiruvchi ketma-ketlikda duragaylashadi. Keyin bo'yoq bilan belgilangan probani primerga qo'shish uchun DNK ligazi qo'shiladi. Bog'lanmagan problar yuviladi, so'ngra lyuminestsentsiya yordamida ko'rish ligatsiyalangan probning identifikatorini aniqlash uchun. Fluoresan bo'yoqni olib tashlash va keyingi ligatsiya davrlari uchun 5′-PO4 guruhini qayta tiklash uchun ajratiladigan problar yordamida tsiklni takrorlash mumkin (zanjirli ligatsiya)[15][34]) yoki shablonga yangi astarni olib tashlash va duragaylash (zanjirsiz bog'lash)[17][18]).

Fosfolinkali lyuminestsent nukleotidlar yoki real vaqtda ketma-ketlik

Tinch okeani biologlari Haqiqiy vaqtda ketma-ketlik usuli DNK sintezi paytida bo'yoq bilan belgilangan nukleotidlarning uzluksiz qo'shilishini tasvirlashni o'z ichiga oladi: bitta DNK polimeraza molekulalari individual nol holatidagi to'lqin o'tkazgich detektorlarining (Zmw detektorlari) pastki yuzasiga biriktirilgan esa ketma-ketlik ma'lumotlarini olish fosforli nukleotidlar o'sib boruvchi primer qatoriga qo'shilmoqda.Pacific Bioscience noyob DNK polimerazidan foydalanadi, u fosfollangan nukleotidlarni yaxshiroq qo'shadi va yopiq dumaloq shablonlarni qayta o'rnatishga imkon beradi, bir martalik o'qish aniqligi 87% bo'lsa, konsensus aniqligi 99,999% da ko'p -kilobase o'qish uzunligi.[35][36] 2015 yilda Pacific Bioscience Sequel System deb nomlangan yangi sekvensiya vositasini chiqardi, bu esa quvvatni taxminan 6,5 baravar oshiradi.[37][38]

Shuningdek qarang

Adabiyotlar

  1. ^ a b M. Ronagi; S. Karamohamed; B. Pettersson; M. Uhlen va P. Nyren (1996). "Pirofosfat ajralishini aniqlash yordamida real vaqtda DNK sekvensiyasi". Analitik biokimyo. 242 (1): 84–9. doi:10.1006 / abio.1996.0432. PMID  8923969.
  2. ^ a b AQSh Patenti 5 641 658 Nuklein kislotani bitta qattiq tayanchga bog'langan ikkita primer bilan kuchaytirishni amalga oshirish usuli. Ixtirochilar: Kristofer P. Adams, Stiven Jozef Kron
  3. ^ a b dastur WO1998044151A1, Loran Farinelli, Erik Kavashima, Paskal Mayer, "Nuklein kislotasini ko'paytirish usuli", 1998-10-08 yillarda nashr etilgan 
  4. ^ a b dastur WO1998044152A1, Loran Farinelli, Erik Kavashima, Paskal Mayer, "Nuklein kislota sekvensiyasi usuli", 1998-10-08 yillarda nashr etilgan 
  5. ^ a b P. Mayer va boshq., Xaritada Beshinchi Xalqaro Avtomatlashtirish va DNK Tartiblash Konferentsiyasida, Sent-Luis, MO, AQSh, AQSh (7-10 oktyabr, 1998). DNK koloniyasi massiv ravishda parallel ketma-ketlik ams98 taqdimoti "DNKning yangi 2 o'lchovli avtomatik paternlash jarayoniga asoslangan juda katta miqyosli, yuqori o'tkazuvchanlik va arzon narxlardagi DNK sekvensiyasi usuli" Tekshiring | url = qiymati (Yordam bering).CS1 maint: bir nechta ism: mualliflar ro'yxati (havola)
  6. ^ Karl V. Voelkerding; Sale A. Dames & Jacob D. Durtschi (2009). "Keyingi avlod ketma-ketligi: asosiy tadqiqotlardan diagnostikaga qadar". Klinik kimyo. 55 (4): 641–658. doi:10.1373 / clinchem.2008.112789. PMID  19246620.
  7. ^ Metyu V. Anderson; Iris Schrijver (2010). "Keyingi avlod DNKning ketma-ketligi va genomik tibbiyot kelajagi". Genlar. 1 (1): 38–69. doi:10.3390 / genlar1010038. PMC  3960862. PMID  24710010.
  8. ^ Treysi Taker; Marko Marra va Jan M. Fridman (2009 yil avgust). "Genetik tibbiyotda navbatdagi katta narsa. Am J Hum Genet. 85 (2): 142–54. doi:10.1016 / j.ajhg.2009.06.022. PMC  2725244. PMID  19679224.
  9. ^ Andreas Von Bubnoff (2008). "Keyingi avlod ketma-ketligi: musobaqa davom etmoqda". Hujayra. 132 (5): 721–723. doi:10.1016 / j.cell.2008.02.028. PMID  18329356.
  10. ^ "2008 yil chiqarilishi: NHGRI muntazam ravishda laboratoriya va tibbiy maqsadlarda foydalanishga yaroqli DNK ketma-ketligini aniqlash texnologiyasini izlaydi". Genome.gov. Olingan 2012-08-05.
  11. ^ "Arxivlangan nusxa". Arxivlandi asl nusxasi 2014-12-06 kunlari. Olingan 2014-11-06.CS1 maint: nom sifatida arxivlangan nusxa (havola)
  12. ^ "Arxivlangan nusxa". Arxivlandi asl nusxasi 2014-11-06 kunlari. Olingan 2014-11-06.CS1 maint: nom sifatida arxivlangan nusxa (havola)
  13. ^ a b patent US7790869B2, Jingyue Ju, Zengmin Li, Jon Robert Edvards, Yasuxiro Itagaki, "DNK va RNKni dekodlashning massiv parallel usuli", 2010-09-07 
  14. ^ a b Bentley DR va boshq. (2008 yil 6-noyabr). "Qayta tiklanadigan terminatorlar kimyosi yordamida butun inson genomini aniq tartiblash". Tabiat. 456 (7218): 53–9. Bibcode:2008 yil, n.456 ... 53B. doi:10.1038 / nature07517. PMC  2581791. PMID  18987734.
  15. ^ a b McKernan KJ va boshq. (Sentyabr 2009). "Ikki asosli kodlash yordamida qisqa o'qilgan, massiv parallel ravishda ligatsiya ketma-ketligi bilan ochilgan inson genomidagi ketma-ketlik va tizimli o'zgarish". Genom Res. 19 (9): 1527–41. doi:10.1101 / gr.091868.109. PMC  2752135. PMID  19546169.
  16. ^ "Ion torrent". Arxivlandi asl nusxasi 2013 yil 30 dekabrda. Olingan 1 yanv 2014.
  17. ^ a b Drmanac R va boshq. (2010). "Zanjirsiz tayanch yordamida inson genomining ketma-ketligi o'z-o'zini yig'adigan DNK nanoarralar o'qiydi". Ilm-fan. 327 (5961): 78–81. Bibcode:2010Sci ... 327 ... 78D. doi:10.1126 / science.1181498. PMID  19892942.
  18. ^ a b Shendure J, Porreca GJ, Reppas NB, Lin X, McCutcheon JP, Rosenbaum AM, Vang MD, Zhang K, Mitra RD, Church GM (2005). "Rivojlangan bakteriyalar genomining aniq multipleksiyali poloniy ketma-ketligi". Ilm-fan. 309 (5741): 1728–32. Bibcode:2005 yil ... 309.1728S. doi:10.1126 / science.1117389. PMID  16081699.
  19. ^ Peters BA va boshq. (2012). "Odamning 10-20 hujayrasidan genomni aniq sekvensiyalash va haplotiplash". Tabiat. 487 (7406): 190–195. Bibcode:2012 yil natur.487..190P. doi:10.1038 / tabiat11236. PMC  3397394. PMID  22785314.
  20. ^ Tinch okean biokompaniyalari DNKning ketma-ketligi va yirik organizmlarning genomini o'rganish bo'yicha yangi xususiyatlarni aniqlash uchun uzoqroq o'qish uzunlikdagi yangi kimyo bilan tanishadilar.
  21. ^ Leks Nederbragt (2013-07-05). "De novo bakterial genom assambleyasi: hal qilingan muammo?".
  22. ^ Karl V. Voelkerding; Shale Dames va Jacob D. Durtschi (sentyabr 2010). "Keyingi avlod diagnostikasi". J Molec diagnostikasi. 12 (5): 539–51. doi:10.2353 / jmoldx.2010.100043. PMC  2928417. PMID  20805560.
  23. ^ a b Chee-Seng, Ku; En Yun, Loy; Yudi, Pavitan; va Chi-Seng (Chia). Keyingi avlod ketma-ketligi texnologiyalari va ularning qo'llanilishi. In: Hayot fanlari ensiklopediyasi (ELS). John Wiley & Sons, Ltd: Chichester. 2010 yil aprel
  24. ^ a b v Metzker ML (yanvar 2010). "Tartiblash texnologiyalari - kelajak avlod". Nat Rev Genet. 11 (1): 31–46. doi:10.1038 / nrg2626. PMID  19997069.
  25. ^ Dressman D, Yan H, Traverso G, Kinzler KW, Vogelshteyn B (2003 yil 22-iyul). "Genetik o'zgarishlarni aniqlash va sanab chiqish uchun bitta DNK molekulalarini lyuminestsent magnit zarralarga aylantirish". Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (15): 8817–22. Bibcode:2003 PNAS..100.8817D. doi:10.1073 / pnas.1133470100. PMC  166396. PMID  12857956.
  26. ^ a b patent US6485944B1, Jorj M. Cherch, Rob Mitra, "Nuklein kislota massivlarining replika amplifikatsiyasi", 2002-11-26 yillarda nashr etilgan 
  27. ^ a b Mitra R, Cherkov GM (dekabr 1999). "Ko'pgina individual DNK molekulalarini in situ lokalize amplifikatsiyasi va kontakt replikatsiyasi". Nuklein kislotalari rez. 27 (24): e34, 1-6. doi:10.1093 / nar / 27.24.e34. PMC  148757. PMID  10572186.
  28. ^ dastur WO2007120208A3, Jorj M cherkovi, Gregori J Porreca, Avraem Rozenbaum, Jey Shendure, "Nanogrid dumaloq dna sekvensiya", 2008-08-28 
  29. ^ patent US8445194B2, Radoje Drmanak, Metyu J. Kellu, Snezana Drmanak, Brayan K. Xauzer, Jorj Yeung, "Genetik va kimyoviy tahlil uchun yagona molekula massivlari", 2013-05-21 
  30. ^ DNKning yuqori tezlikda ketma-ketligi - tushunchalar va cheklovlar, Martin Kirher va Janet Kelso, Bioessays 32: 524-536, 2010 WILEY Periodicals Inc.
  31. ^ dastur WO2001023610A2, Shankar Balasubramanian, "Polinukleotidlar ketma-ketligi", 2001-04-05 yillarda nashr etilgan 
  32. ^ "Sinov texnologiyasi". Illumina. Arxivlandi asl nusxasi 2012-08-26. Olingan 2012-08-05.
  33. ^ "Haqiqiy yagona molekulalar ketma-ketligi (tSMS ™): Helicos BioScience". Helicosbio.com. Arxivlandi asl nusxasi 2012-03-11. Olingan 2012-08-05.
  34. ^ "Ikki asosiy kodlash va rang makonining asoslari". Appliedbiosystems.cnpg.com. Olingan 2012-08-05.
  35. ^ Chin CS, Aleksandr DH, Marks P, Klammer AA, Drake J, Heiner C, Clum A, Copeland A, Xaddlston J, Eichler EE, Tyorner SW, Korlach J (iyun 2013). "Uzoq o'qilgan SMRT ketma-ketlik ma'lumotlaridan olingan gibrid bo'lmagan, tugatilgan mikrobial genom to'plamlari". Nat usullari. 10 (6): 563–9. doi:10.1038 / nmeth.2474. PMID  23644548.
  36. ^ Monika Xeger (2013 yil 5 mart). "PacBio foydalanuvchilari o'simlik genomini yig'ish, inson genomining qiyin mintaqalari bo'yicha uzoq o'qishdagi ishlar to'g'risida hisobot berishadi".
  37. ^ "PacBio yuqori o'tkazuvchanlik, arzon narxlardagi bitta molekulali ketma-ketlik tizimini ishga tushirdi".
  38. ^ http://www.bio-itworld.com/2015/9/30/pacbio-announces-sequel-sequencing-system.aspx