Ichki polimeraza zanjiri reaktsiyasi - Nested polymerase chain reaction

Ichki PCR usulini aks ettiruvchi diagramma.

Ichki polimeraza zanjiri reaktsiyasi (Ichki PCR) ning modifikatsiyasi polimeraza zanjiri reaktsiyasi kutilmagan primer bog'lash joylarini kuchaytirish tufayli mahsulotlarning o'ziga xos bo'lmagan ulanishini kamaytirishga mo'ljallangan.[1]

Polimeraza zanjiri reaktsiyasi

Polimeraza zanjiri reaktsiyasi o'zi - bu kuchaytirish uchun ishlatiladigan jarayon DNK namunalar, harorat vositachiligida DNK polimeraza. Mahsulotlar uchun ishlatilishi mumkin ketma-ketlik yoki tahlil qilish va bu jarayon ko'pchilikning asosiy qismidir genetika tadqiqot laboratoriyalari, ulardan foydalanish bilan birga DNK barmoq izlari uchun sud tibbiyoti va insonning boshqa genetik holatlari. An'anaviy PCR talab qiladi astarlar maqsadli DNK terminini to'ldiruvchi. PCR dan mahsulot miqdori reaktsiya ta'sirida bo'lgan harorat tsikllari soniga qarab ortadi. Odatda paydo bo'ladigan muammo DNKning noto'g'ri hududlari bilan bog'lanib, kutilmagan mahsulotlarni keltirib chiqaradigan primerlardir. Ushbu muammo PCR davrlarining ko'payishi bilan yanada kuchayadi.

Astarlar

Ichki polimeraza zanjiri reaktsiyasi polimeraza zanjiri reaktsiyasining ketma-ket ikki marshrutida ishlatiladigan ikkita primer to'plamini o'z ichiga oladi, ikkinchisi birinchi ish mahsulotidagi ikkilamchi nishonni kuchaytirishga mo'ljallangan. Bu birinchi bosqichda kam miqdordagi yugurishlarni kuchaytirishga imkon beradi va o'ziga xos bo'lmagan mahsulotlarni cheklaydi. Ikkinchi ichki astar to'plami faqat mo'ljallangan mahsulotni kuchaytirishning birinchi bosqichidan kuchaytirishi kerak, o'ziga xos bo'lmagan mahsulot. Bu o'ziga xos bo'lmagan mahsulotlarni minimallashtirish paytida ko'proq tsikllarni ishlashga imkon beradi. Bu noyob shablonlar yoki yuqori fonli PCR uchun foydalidir.

Jarayonlar

Maqsadli DNK polimeraza zanjiri reaktsiyasini birinchi marta yashil rangda ko'rsatilgan primerlar to'plami bilan o'tkazadi. Muqobil va shunga o'xshash primer bog'lash joylari tanlovi mahsulotlarning tanlovini beradi, faqat bitta mo'ljallangan ketma-ketlikni o'z ichiga oladi.

Birinchi reaktsiyadan olingan mahsulot qizil rangda ko'rsatilgan ikkinchi primer to'plami bilan ikkinchi marta ishlaydi. Kiruvchi PCR mahsulotlarining har ikkalasida ham yangi primerlarni bog'lash joylari bo'lishi ehtimoldan yiroq emas, chunki mahsulotning ikkinchi PCR-dan astar dimerlari, soch qisqichlari va muqobil primer maqsadlar ketma-ketligining kiruvchi mahsulotlaridan ozgina ifloslanishi bor.

Adabiyotlar

  1. ^ Elizabeth van Pelt-Verkuil; Aleks van Belkum; Jon P. Xeys (2008 yil 14 mart). PCR kuchaytirish tamoyillari va texnik jihatlari. Springer Science & Business Media. 190– betlar. ISBN  978-1-4020-6241-4.