PGLO - pGLO - Wikipedia

Chapda: Atrof muhit yorug'ligi ostida pGLO bilan o'zgargan bakteriyalar
To'g'ri:Ultraviyole nurlar ostida vizualizatsiya qilingan pGLO bilan o'zgargan bakteriyalar
Chapda: Ampitsillin va atrof-muhit nurlari ta'sirida pGLO bilan o'zgargan bakteriyalar
To'g'ri:Ampitsillin va ultrabinafsha nurlar ta'sirida pGLO bilan o'zgargan bakteriyalar

The pGLO plazmid muhandislik plazmid ichida ishlatilgan biotexnologiya yaratish uchun vektor sifatida genetik jihatdan o'zgartirilgan organizmlar. Plazmid tarkibida bir nechtasi mavjud muxbir genlar, eng muhimi yashil lyuminestsent oqsil (GFP) va ampitsillinga qarshilik geni. Jele baliqlaridan GFP ajratib olindi Aequorea victoria. Chunki u ikki yo'nalishga ega targ'ibotchi metabolizm uchun gen bilan arabinoz, GFP geni arabinoz ishtirokida ifodalanadi, bu transgen organizmni o'z floresansini UV nurlari. PGLO plazmidini o'z ichiga olgan bakteriyalarda GFP ularni + arabinoz plitalarida o'stirish orqali hosil bo'lishi mumkin. pGLO tomonidan ishlab chiqarilgan Bio-Rad laboratoriyalari.

Tuzilishi

pGLO rekombinant DNK texnologiyasi yordamida birlashtirilgan uchta gendan iborat. Ular quyidagichadir:

  • Bla, ferment uchun kodlar beta-laktamaza o'zgartirilgan bakteriyalarga beta-laktam antibiotiklar oilasiga qarshilik ko'rsatish (masalan penitsillin oila)
  • araC, GFP ekspressionini tartibga soluvchi promouter mintaqa (xususan, GFP geni faqat mavjud bo'lganda ifodalanadi arabinoz )
  • GFP, yashil lyuminestsent oqsil, bu hujayralar bu turdagi oqsilni ishlab chiqaradigan bo'lsa, yashil rang beradi

Ko'pgina boshqa dumaloq plazmidlar singari, pGLO plazmidida plazmidning replikatsiya boshlanadigan mintaqasi bo'lgan kelib chiqishi (ori) mavjud. PGLO plazmidasi tadqiqotchilar tomonidan mashhur bo'lgan Frantsiya kim uni yashil lyuminestsent ishlab chiqarish uchun ishlatgan quyon nomlangan Alba.

PGLO-ning boshqa xususiyatlari, boshqa ko'pgina plazmidlar singari, quyidagilarga kiradi: tanlanadigan marker, Ori (replikatsiyaning kelib chiqishi ) va MCS (bir nechta klonlash sayti ) GFP genining oxirida joylashgan. Plazmid 5371 ga teng tayanch juftliklari uzoq. Yilda o'ralgan shaklida ishlaydi, u an ishlaydi agaroza jeli 4200-4500 oralig'ida.[1][2][3]

GFP kashfiyoti

GFP genini birinchi bo'lib Osamu Shimomura kuzatgan[4] va uning jamoasi 1962 yilda meduzani o'rganayotganda Aequorea victoria soyabonlari ostida moviy nur uzuklari bor. Shimomura va uning jamoasi oqsilni ajratib olishdi ekvorin oqsilni to'liq tahlil qilish uchun etarlicha to'planguniga qadar minglab meduzalardan. Aekvorini o'rganish orqali Shimomura oz miqdordagi GFPni topdi, u aekorin ko'k nur chiqarganda yashil rangda yonadi. GFP meduzadagi ekvorin bilan qanday ishlashini muvaffaqiyatli o'rganib chiqqandan so'ng, u boshqa organizmlarda biolyuminesansni o'rganish uchun bir chetga surib qo'ydi.

Plyaj rasmini chizish uchun turli xil ranglarda yonib turadigan mutant GFP misoli

1994 yilda Marti Chalfie[4] va uning jamoasi GFP oqsilini ifoda etadigan bakteriyalar va yumaloq qurtlarni muvaffaqiyatli yaratishga muvaffaq bo'lishdi. Ko'p o'tmay, Rojer Tsien[5] va uning jamoasi nafaqat yashil rang, balki bir qator ranglarni chiqaradigan mutant GFP yaratishga muvaffaq bo'ldi.

Uch olim 2008 yil kimyo bo'yicha Nobel mukofotiga ega[6] yashil lyuminestsent oqsil, GFPni kashf qilish va rivojlantirish uchun.


Adabiyotlar

  1. ^ "GFP ning Biotechnology Explorer ™ oqsilli elektroforezi: pGLO ™ bakterial transformatsiya to'plamining kengaytmasi" (PDF). Arxivlandi asl nusxasi (PDF) 2012-02-24.
  2. ^ Eichbaum QG, Iyer R, Raveh DP, Mathieu C, Ezekowitz RA (iyun 1994). "Interferon gamma ta'sirchanligini cheklash va miyeloid odamning Fc gamma R1b genining bazal ekspressioni PU.1 funktsional maydoni va transkripsiyani boshlash tashabbusi bilan vositachilik qiladi". Eksperimental tibbiyot jurnali. 179 (6): 1985–96. doi:10.1084 / jem.179.6.1985. PMC  2191524. PMID  8195721.
  3. ^ Eichbaum Q, Xeni D, Raveh D, Chung M, Devidson M, Epshteyn J, Ezekovits RA (1997 yil noyabr). "Murin makrofagining mannoz retseptorlari promouteri PU.1 va SP1 transkripsiya omillari bilan tartibga solinadi". Qon. 90 (10): 4135–43. doi:10.1182 / qon.V90.10.4135. PMID  9354684. Arxivlandi asl nusxasi 2005-04-21.
  4. ^ a b Feribot, Jorjina (2018). "Osamu Shimomura". Tabiat. 563: 627 - Gale orqali kontekst: Science.
  5. ^ "Yashil lyuminestsent oqsillar tarixi". Conncoll.edu.
  6. ^ "Kimyo bo'yicha Nobel mukofoti 2008". NobelPrize.org. Olingan 2020-10-19.