TUNEL sinovi - TUNEL assay - Wikipedia

TUNEL bilan bo'yalgan apoptotik hujayrani ko'rsatadigan sichqon jigari

Deoksinukleotidil transferaza terminali dUTP nick end yorlig'i (Tunel) - bu aniqlash usuli DNKning parchalanishi ichida 3′- gidroksil terminini belgilash orqali ikki zanjirli DNK sinadi davomida hosil qilingan apoptoz.[1][2]

Usul

TUNEL - bu aniqlash usuli apoptotik DNK apoptotik hujayralarni aniqlash va miqdorini aniqlash yoki alohida hujayralardagi DNKning haddan tashqari sinishini aniqlash uchun keng ishlatiladigan parchalanish.[3] The tahlil qilish dan foydalanishga tayanadi terminal deoksinukleotidil transferaza (TdT), an ferment bu kataliz qiladi a bilan belgilangan deoksinukleotidlarning biriktirilishi floroxrom yoki boshqasi marker, DNKning 3'-gidroksil terminigacha ikki qatorli uzilishlari. Shuningdek, u apoptoz jarayonida emas, balki boshqa vositalar bilan zararlangan DNKga ega hujayralarni belgilashi mumkin.

Tarix

Uchun qo'llaniladigan floroxrom asosidagi TUNEL tekshiruvi oqim sitometriyasi, ga nisbatan DNK zanjirining uzilishini aniqlashni birlashtiradi hujayra aylanishi -faza pozitsiyasi, dastlab Gorczyca va boshq.[4] Shu bilan birga, qo'llaniladigan avidin-peroksidaza markirovka tahlillari nurni yutish mikroskop Gavrieli va boshq.[5] 1992 yildan beri TUNEL apoptotik dasturlashtirilgan hujayralar o'limini aniqlashning asosiy usullaridan biriga aylandi.[6] Biroq, bir necha yillar davomida asl tahlilda yuzaga kelgan muammolar tufayli uning aniqligi to'g'risida munozaralar mavjud nekrotik apoptotik deb nomlanishi kerak bo'lgan hujayralar.[7] Keyinchalik bu usul keskin takomillashtirildi va agar to'g'ri bajarilsa, faqat oxirgi bosqichdagi hujayralarni aniqlash kerak apoptoz.[8][9] Yangi usullar floroforlar yoki haptenlar bilan o'zgartirilgan dUTPlarni o'z ichiga oladi, shu jumladan biotin yoki brom to'g'ridan-to'g'ri lyuminestsent bilan o'zgartirilgan holda aniqlanishi mumkin nukleotid (ya'ni, flüoresan-dUTP), yoki bilvosita streptavidin bilan yoki antikorlar, agar navbati bilan biotin-dUTP yoki BrdUTP ishlatilsa. Ulardan eng sezgirligi BrdUTP-ni qo'shilish usulidir TdT keyin immunotsitokimyoviy aniqlash BrdU.[10]

Adabiyotlar

  1. ^ Gorczyca V, Traganos F, Jesionowska H, ​​Darzynkievic Z (1993). "DNK zanjirining uzilishi va DNKning in situ-dagi odamning g'ayritabiiy sperma hujayralarida denaturatsiyaga sezgirligi oshishi. Somatik hujayralar apoptoziga o'xshashligi". Exp Cell Res. 207 (1): 202–205. doi:10.1006 / excr.1993.1182. PMID  8391465.
  2. ^ Lozano GM, Bejarano I, Espino J, Gonsales D, Ortiz A, Garsiya JF, Rodrigez AB, Pariente JA (2009). "Zichlik gradiyenti sig'imi urug'lantirishni yaxshilash va bepusht erkaklarning DNKning parchalanishini kamaytirish uchun eng mos usuldir". Anadolu akusherlik va ginekologiya jurnali. 3 (1): 1–7.
  3. ^ Lozano GM, Bejarano I, Espino J, Gonsales D, Ortiz A, Garsiya JF, Rodrigez AB, Pariente JA (2009). "Vodorod peroksid va progesteronga javoban kaspaz faolligi va inson spermasidagi apoptotik belgilar bilan o'zaro bog'liqlik". Ko'paytirish va rivojlantirish jurnali. 55 (6): 615–621. doi:10.1262 / jrd.20250. PMID  19734695.
  4. ^ Gorczyca V, Bruno S, Darzinkievic RJ, Gong J, Darzinskiy Z (1992). "Apoptoz paytida yuzaga keladigan DNK zanjirining uzilishi: ularni deoksinukleotidil transferaza terminali va nikni tarjima qilish usullari orqali serin proteaz inhibitörlerinin oldini olish. Xalqaro onkologiya jurnali. 1 (6): 639–648. doi:10.3892 / ijo.1.6.639. PMID  21584593.
  5. ^ Gavrieli Y, Sherman Y, Ben-Sasson SA (1992). "Yadro DNK fragmentatsiyasining o'ziga xos yorlig'i orqali in situ-da hujayralardagi dasturlashtirilgan o'limni aniqlash". J. Hujayra Biol. 119 (3): 493–501. doi:10.1083 / jcb.119.3.493. PMC  2289665. PMID  1400587.CS1 maint: bir nechta ism: mualliflar ro'yxati (havola)
  6. ^ Darzinskiy Z, Galkovski D, Zhao H (2008). "TUNEL assay yordamida sitometriya yordamida apoptozni tahlil qilish". Usullari. 44 (3): 250–254. doi:10.1016 / j.ymeth.2007.11.008. PMC  2295206. PMID  18314056.
  7. ^ Grasl-Kraupp B, Ruttkay-Nedekki B, Koudelka H, ​​Bukovskka K, Bursch V, Shulte-Xerman R (1995). "Parchalangan DNKni (TUNEL tahlilini) joyida aniqlash apoptoz, nekroz va hujayraning avtolitik o'limini kamsitmaydi: ehtiyotkorlik bilan eslatma". Gepatologiya. 21 (5): 1465–8. doi:10.1002 / hep.1840210534. PMID  7737654.
  8. ^ Negoescu A, Lorimier P, Labat-Moleur F, Drouet C, Robert C, Guillermet C, Brambilla C, Brambilla E (1996). "TUNEL usuli bo'yicha in situ apoptotik hujayralarni yorlig'i: hujayra preparatlarini takomillashtirish va baholash". J histokem sitokimi. 44 (9): 959–68. doi:10.1177/44.9.8773561. PMID  8773561.
  9. ^ Negoescu A, Guillermet C, Lorimier P, Brambilla E, Labat-Moleur F (1998). "TUNEL o'ziga xosligi bo'yicha apoptozda DNK parchalanishining ahamiyati". Biomed farmakoter. 52 (6): 252–8. doi:10.1016 / S0753-3322 (98) 80010-3. PMID  9755824.
  10. ^ Li X, Darzinkievich Z (1995). "BrnUTP bilan DNK zanjiri yorilishi. Apoptoz va hujayralar ko'payishini aniqlash". Hujayraning tarqalishi. 28 (11): 571–579. doi:10.1111 / j.1365-2184.1995.tb00045.x. PMID  8555370.

Tashqi havolalar