RNK ekstraktsiyasi - RNA extraction

RNK ekstraktsiyasi ning tozalanishi RNK biologik namunalardan. Ushbu protsedura hamma joyda mavjudligi bilan murakkablashadi ribonukleaz hujayralar va to'qimalardagi fermentlar, bu RNKni tezda pasaytirishi mumkin.[1] Inda bir nechta usullardan foydalaniladi molekulyar biologiya namunalardan RNKni ajratish uchun ulardan eng keng tarqalgani guanidinyum tiosiyanat-fenol-xloroform ekstraktsiyasi.[2][3] Filtr qog'oziga asoslangan lizis va elusiya usuli yuqori o'tkazuvchanlik xususiyatiga ega.[4]

Suyuq azotda RNK ekstrakti, odatda eritma va pestle yordamida (yoki to'qima pulverizatorlari deb ataladigan ixtisoslashgan po'lat qurilmalar) ribonukleaza faolligini oldini olishda ham foydalidir.

RNazning ifloslanishi

Molekulyar biologiya tajribalarida RNKning ekstraktsiyasi RNK namunalarini buzadigan hamma joyda va qattiq RNazlarning mavjudligi bilan juda murakkablashadi. Ba'zi bir RNazlar juda bardoshli bo'lishi mumkin va ularni zararsizlantirish zararsizlantirish bilan taqqoslaganda qiyin DNAZLAR. Chiqaradigan uyali RNazlardan tashqari atrof-muhitda mavjud bo'lgan bir nechta RNazlar mavjud. RNazlar turli xil organizmlarda hujayradan tashqari ko'plab funktsiyalarga ega bo'lib rivojlangan.[5][6][7] Masalan, RNase 7, ning a'zosi RNase A superfamily, inson terisi tomonidan ajralib chiqadi va kuchli antipatogen himoya vazifasini bajaradi.[8][9] Ushbu ajratilgan RNazlar uchun fermentativ faollik RNaz uchun zarur bo'lmasligi ham mumkin chiqarilgan funktsiya. Masalan, immun RNazlar bakteriyalarning hujayra membranalarini beqarorlashtirish orqali harakat qiladi.[10][11]

Bunga qarshi turish uchun RNK ekstraktsiyasi uchun ishlatiladigan uskunalar odatda yaxshilab tozalanadi, umumiy laboratoriya jihozlaridan ajratilgan holda saqlanadi va RNazlarni yo'q qiladigan turli xil qattiq kimyoviy moddalar bilan ishlanadi. Xuddi shu sababga ko'ra, tajriba o'tkazuvchilar o'zlarining yalang'och terisini jihozga tegishiga yo'l qo'ymaslik uchun alohida e'tibor berishadi.

Shuningdek qarang

Adabiyotlar

  1. ^ Peirson SN, Butler JN (2007). "Sutemizuvchilar to'qimalaridan RNK ekstraktsiyasi". Sirkadiyalik ritmlar. Usullari Mol. Biol. Molekulyar biologiya usullari. 362. pp.315–27. doi:10.1007/978-1-59745-257-1_22. ISBN  978-1-58829-417-3. PMID  17417019.
  2. ^ Xomchinski P, Sacchi N (2006). "Kislota guanidinyum tiosiyanat-fenol-xloroform ekstraktsiyasi bilan RNKni ajratib olishning bir bosqichli usuli: yigirma bir yildan keyin". Nat protokoli. 1 (2): 581–5. doi:10.1038 / nprot.2006.83. PMID  17406285. S2CID  28653075.
  3. ^ Bird IM (2005). "RNKni hujayralar va to'qimalardan ajratib olish". Usullari Mol. Med. 108: 139–48. doi:10.1385/1-59259-850-1:139. ISBN  1-59259-850-1. PMID  16028681.
  4. ^ FortiusBio yuqori rentabellikga ega bo'lgan RNK ekstrakti filtri qog'oz kartasi
  5. ^ Rossier, O .; Dao, J .; Cianciotto, N. P. (2009). "Legionella pneumophila ning II turidan ajratilgan RNase Hartmannella vermiformisning hujayra ichidagi infektsiyasini engillashtiradi". Mikrobiologiya. 155 (3): 882–890. doi:10.1099 / mikrofon.0.023218-0. PMC  2662391. PMID  19246759.
  6. ^ Luhtala, N .; Parker, R. (2010). "T2 oilaviy ribonukleazalar: turli xil rollarga ega qadimgi fermentlar". Biokimyo fanlari tendentsiyalari. 35 (5): 253–259. doi:10.1016 / j.tibs.2010.02.002. PMC  2888479. PMID  20189811.
  7. ^ Dayer, K. D .; Rozenberg, H. F. (2006). "RNase superfamily: xilma-xillik va tug'ma mezbonlarni himoya qilish avlodi". Molekulyar xilma-xillik. 10 (4): 585–597. doi:10.1007 / s11030-006-9028-2. PMID  16969722. S2CID  20922592.
  8. ^ Harder, J. (2002). "RNase 7, sog'lom inson terisining tug'ma immunitetni himoya qilish mikroblarga qarshi oqsili". Biologik kimyo jurnali. 277 (48): 46779–46784. doi:10.1074 / jbc.M207587200. PMID  12244054.
  9. ^ Köten, B .; Simanski, M.; Gleyser, R .; Podsun, R .; Shreder, J. M .; Harder, J. R. (2009). "RNase 7 Enterococcus faecium-dan terini himoya qilishga hissa qo'shadi". PLOS ONE. 4 (7): e6424. doi:10.1371 / journal.pone.0006424. PMC  2712763. PMID  19641608.
  10. ^ Xuang, Y.-C .; Lin, Y. -M .; Chang, T. -W .; Vu, S. -J .; Li, Y.-S .; Chang, M. D. -T .; Chen, C .; Vu, S. -H .; Liao, Y.-D. (2006). "Insonning ribonukleazasi 7 ning moslashuvchan va klasterli lizin qoldiqlari membranani o'tkazuvchanligi va mikroblarga qarshi faolligi uchun juda muhimdir". Biologik kimyo jurnali. 282 (7): 4626–4633. doi:10.1074 / jbc.M607321200. PMID  17150966.
  11. ^ Rozenberg, H. F. (2008). "RNase ribonukleazlar va mezbonlarning himoyasi: rivojlanayotgan voqea". Leykotsitlar biologiyasi jurnali. 83 (5): 1079–87. doi:10.1189 / jlb.1107725. PMC  2692241. PMID  18211964.


Tashqi havolalar

Tijorat nuklein-kislota ekstraktsiyasi to'plamlarida hamma joyda ifloslantiruvchi moddalarni olib o'tish muammosini hal qilish uchun ikki fazali yuvish; Erik Jyu, Daan Witters va Rustem F. Ismagilov tomonidan; Tabiat, ilmiy ma'ruzalar, 2020 yil.